CART在不同发育阶段牛卵泡颗粒细胞中的表达和定位

发布时间：2017-08-23 17:35

  本文关键词：CART在不同发育阶段牛卵泡颗粒细胞中的表达和定位

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【摘要】：【目的】探讨牛卵泡颗粒细胞中可卡因-苯丙胺调节转录肽(cocaine-and amphetamine-regulated transcript,CART)的表达对牛不同阶段卵泡发育的影响。【方法】通过对牛卵泡转录组ODF1(the largest onset of deviation follicle)和ODF2(the second largest onset of deviation follicle)颗粒细胞(granulesa cells,GCs)构建RNA文库,Illumina Hi Seq 2000平台测序;采集屠宰牛双侧卵巢,通过黄体形态特征筛选处于第一卵泡波阶段的最大卵泡和第二大卵泡;分别抽取卵泡液,竞争性ELISA法测定卵泡液雌激素(estrodiol,E2)和孕酮(progestin,P)浓度,确定优势卵泡(dominant follicles,DF)和从属卵泡(subordinate follicles,SF);分别分离DF和SF颗粒细胞(granulosa cells,GCs),提取总RNA;设定3个重复样本,以RPLP0作为内参基因,设计引物在牛DF和SF进行q RT-PCR表达量检测,Graph Pad Prism 5.0作图并进行显著性分析;兔抗CART一抗检测CART在牛卵泡的表达。【结果】转录组测序结果显示,CART在ODF1的表达量是ODF2的38.2倍;通过黄体形态特征及激素测定共筛选出3头牛的卵泡发育处于第一卵泡波,并获得DF和SF;q RT-PCR结果显示CART在DF与SF的表达量差异极显著(P0.01),高达2 310倍,与转录组测序结果的表达差异趋势一致;免疫组化结果表明,CART在牛DF和SF中均有表达,且DF表达量明显高于SF,同时,CART主要在卵泡颗粒细胞层表达。【结论】在牛卵泡发育过程中,卵泡发育选择期有其它抑制因子抑制了大多数卵泡的发育,阻止其成为DF;当出现偏差后,CART的高表达抑制了DF进入排卵期,推测CART可能是通过促进卵泡颗粒细胞的凋亡,进一步抑制了颗粒细胞层E2的分泌,最终导致DF闭锁。
【作者单位】： 山西农业大学生命科学学院;山西农业大学动物科技学院;
【关键词】： 牛 卵泡 发育 CART 表达
【基金】：国家自然基金(31172211) 农业部“948”项目(2010-Z43) 山西省横向协作与委托项目(2010HX54) 山西省回国留学人员科研资助项目(2014-重点5) 山西省科技攻关项目(20130311027-2) 山西省人事厅人才引进项目 山西农业大学引进人才博士科研启动费(2014ZZ04) 科研管理费资助重大项目和标志性成果培育项目(71060003)
【分类号】：S823
【正文快照】： 0引言【研究意义】单胎动物在一个发情周期均会出现2—3个卵泡发育波,一般只有最后一个卵泡波中的优势卵泡最终排卵,排卵率低一直是影响单胎家畜繁殖环节的关键因素。可卡因-苯丙胺调节转录肽(cocaine-and amphetamine-regulated transcript,CART)属于动物下丘脑分泌的神经肽,

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本文编号：726383