转内切葡聚糖酶乳酸杆菌的构建及其对獭兔生产性能和免疫性能的影响

发布时间：2017-08-23 17:20

  本文关键词：转内切葡聚糖酶乳酸杆菌的构建及其对獭兔生产性能和免疫性能的影响

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【摘要】：动物饲料中含有大量的纤维素,其特殊的结构很难被动物胃肠道降解吸收而随粪便排出。动物肠道内某些微生物通过产生纤维素酶来帮助降解纤维素。因此,筛选生长快、产酶活力高的纤维素分解细菌,是得到纤维素酶的一个有效方法。乳酸菌存在于动物肠道中,通过竞争或产生乳酸等代谢产物来拮抗有害微生物的快速增殖,从而提高动物的生长和免疫能力,是抗生素的有效替代物。本试验分别从獭兔盲肠和回肠内容物中分离出高产纤维素酶的细菌和乳酸杆菌,并对所筛选的产纤维素酶的菌株进行种属鉴定,研究纤维素酶产生菌的酶学性质,并将纤维素酶产生菌的内切葡聚糖酶基因克隆到植物乳杆菌感受态细胞中,构建具有纤维素酶活性的植物乳杆菌。饮水添加给30日龄断奶獭兔,研究其对30日龄断奶獭兔生长性能和免疫性能的影响,为内切葡聚糖酶植物乳杆菌在獭兔生产中的应用提供依据。本试验研究结果如下:1从獭兔盲肠和回肠肠道内分别筛选出一株高产纤维素酶的细菌和乳酸杆菌,经鉴定分别是枯草芽孢杆菌和植物乳酸杆菌。枯草芽孢杆菌在pH为7.0的培养基中培养24h,产纤维素酶酶活性最高;其所产纤维素酶在温度为60℃、pH为7.0的条件下,分解纤维素的能力最高。该酶在pH 4.0~8.0的范围内依然表现出一定的水解能力。2利用引物扩增枯草芽孢杆菌的内切葡聚糖酶基因,将内切葡聚糖酶基因与表达载体pLEM415连接后电转化入植物乳杆菌感受态细胞中,构建转内切葡聚糖酶乳酸杆菌(L.plantarum pLEM-cel)。经检测,该L.plantarum pLEM-cel具有0.046U/mL的纤维素酶活性。3选取60只30日龄健康獭兔,随机分为A、B、C 3组,每组20只,每只为一个重复。其中A组饮水添加10mL 107 cfu/mL L.plantarum pLEM-cel,B组饮水添加10mL107 cfu/mL植物乳杆菌,C组为对照组,饮水添加10mL灭菌的冷冻保护剂(配方见附录6)。两天一次。预饲期4 d,正饲期31 d。正饲期结束后每组选择10只进行屠宰采样,检测生产和免疫指标。结果发现,内切葡聚糖酶植物乳杆菌组獭兔的料重比显著低于对照组,内切葡聚糖酶植物乳杆菌组獭兔的的全净膛率、胸腺指数、十二指肠绒毛高度和绒毛高度/隐窝深度、回肠绒毛高度、血清IgG和肠粘膜SIgA含量显著均高于对照组。结果表明,转内切葡聚糖酶乳酸杆菌能显著降低獭兔的料重比,提高獭兔的生产性能,同时可以显著提高獭兔的全净膛率和免疫能力。综上所述,本试验构建的内切葡聚糖酶植物乳杆菌能够提高獭兔的生长和免疫性能。
【关键词】：獭兔 纤维素酶 植物乳杆菌 转内切葡聚糖酶乳酸杆菌
【学位授予单位】：西北农林科技大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S829.1
【目录】：

• 摘要6-8
• abstract8-13
• 第一章 文献综述13-26
• 1.1 纤维素13-14
• 1.2 纤维素酶14-21
• 1.2.1 纤维素酶的酶切机制14-15
• 1.2.2 纤维素酶在动物生产上的应用15-17
• 1.2.3 纤维素分解菌17-21
• 1.3 乳酸杆菌21-23
• 1.3.1 乳酸杆菌的简介21-22
• 1.3.2 植物乳杆菌22
• 1.3.3 乳酸杆菌与植物乳杆菌在动物中的应用22-23
• 1.4 转基因细菌的研究进展23-24
• 1.5 研究的目的与意义24-26
• 第二章 兔源纤维素分解菌与乳酸杆菌的分离鉴定26-40
• 2.1 材料与方法26-29
• 2.1.1 样品来源26
• 2.1.2 培养基与试剂26-27
• 2.1.3 纤维素分解菌的分离筛选27
• 2.1.4 乳酸杆菌的筛选鉴定27
• 2.1.5 纤维素酶活力的测定27
• 2.1.6 纤维素分解菌及乳酸杆菌的种属鉴定27-28
• 2.1.7 乳酸菌感受态细胞的制备28
• 2.1.8 纤维素分解菌生长条件和产酶能力的研究28
• 2.1.9 纤维素酶酶反应条件的研究28-29
• 2.2 结果与分析29-37
• 2.2.1 纤维素分解细菌的筛选29
• 2.2.2 标准曲线的绘制29-30
• 2.2.3 纤维素分解菌的种属鉴定30-33
• 2.2.4 乳酸菌的种属鉴定33-35
• 2.2.5 纤维素分解菌生长条件和产酶能力的研究35-36
• 2.2.6 纤维素酶酶反应条件的研究36-37
• 2.3 讨论37-39
• 2.3.1 纤维素分解菌的分离鉴定37-38
• 2.3.2 纤维素分解菌产酶条件和酶学特性的研究38
• 2.3.3 乳酸杆菌的分离鉴定38-39
• 2.4 小结39-40
• 第三章 转内切葡聚糖酶基因乳酸杆菌的构建40-46
• 3.1 材料与方法40-42
• 3.1.1 菌株与质粒40
• 3.1.2 试验试剂40
• 3.1.3 试验引物40-41
• 3.1.4 内切葡聚糖酶基因的PCR扩增41
• 3.1.5 胶回收41
• 3.1.6 连接T载体及细菌转化41
• 3.1.7 质粒的提取及鉴定41-42
• 3.1.8 质粒p MD-19T-JT与穿梭载体p LEM415的双酶切与连接42
• 3.1.9 转内切葡聚糖酶基因乳酸杆菌的构建42
• 3.1.10 转内切葡聚糖酶基因乳酸杆菌的检测42
• 3.2 结果与分析42-44
• 3.2.1 内切葡聚糖酶基因的克隆42-43
• 3.2.2 转内切葡聚糖酶基因乳酸杆菌的构建43
• 3.2.3 转内切葡聚糖酶基因乳酸杆菌酶活性分析43-44
• 3.3 讨论44-45
• 3.3.1 内切葡聚糖酶基因的克隆44
• 3.3.2 转内切葡聚糖酶基因乳酸杆菌的构建与检测44-45
• 3.4 小结45-46
• 第四章 乳酸杆菌工程菌对獭兔生产性能与免疫性能的影响46-53
• 4.1 材料与方法46-48
• 4.1.1 试验动物与试验菌株46
• 4.1.2 试验设计46
• 4.1.3 试验日粮46-47
• 4.1.4 饲养管理47
• 4.1.5 试验指标的测定与方法47-48
• 4.1.6 数据处理48
• 4.2 结果与分析48-50
• 4.2.1 转内切葡聚糖酶基因乳酸杆菌对獭兔生长性能与屠宰性能的影响48-49
• 4.2.2 转内切葡聚糖酶基因乳酸杆菌对獭兔免疫性能的影响49-50
• 4.3 讨论50-52
• 4.3.1 转内切葡聚糖酶基因乳酸杆菌对獭兔生产性能与屠宰性能的影响50-52
• 4.3.2 转内切葡聚糖酶基因乳酸杆菌对獭兔免疫性能的影响52
• 4.4 小结52-53
• 第五章 研究结论与创新点53-54
• 5.1 研究结论53
• 5.2 创新点53
• 5.3 有待进一步研究的内容53-54
• 参考文献54-62
• 附录62-65
• 致谢65-66
• 作者简介66

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