慢病毒介导的靶向NDV P基因shRNA对NDV复制的抑制作用

发布时间：2017-08-24 23:24

  本文关键词：慢病毒介导的靶向NDV P基因shRNA对NDV复制的抑制作用

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【摘要】：小干扰RNA(siRNA)诱导的RNA降解可以特异性地抑制病毒感染,它作为一种有效的抗病毒治疗方法正被广泛研究。为了探讨慢病毒介导的shRNA对NDV复制的抑制效果,从而为新城疫病毒的抗病毒研究奠定基础,本研究以新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)P基因为靶基因,构建了靶向NDV P基因的shRNA重组慢病毒表达载体RNAi-341和RNAi-671。将其与辅助细胞共转染293T细胞,获得包装好的重组慢病毒;在鸡胚成纤维细胞(Chicken embryo fibroblast,CEF)和SPF鸡胚上进行了干扰实验,并通过荧光定量PCR和病毒滴度测定检测shRNA对NDV的抑制效果。结果发现,RNAi-341和RNAi-671均能抑制FLAG-P蛋白在293T细胞中的瞬时表达。在CEF细胞感染后16h后,NDV的病毒滴度分别降低了66.6倍和30.6倍;在鸡胚感染48h后,RNAi-341和RNAi-671组NDV病毒的增殖量分别减少99%和98%。RNAi-341与RNAi-671不仅能抑制P基因的转录,还能显著降低NP、M、F、HN和L基因的转录水平。与RNAi-671相比,RNAi-341的抑制效果更好。研究结果表明,慢病毒介导的靶向P基因的shRNA具有抗病毒作用,能够抑制NDV在CEF和鸡胚中的复制,从而为临床防治NDV提供一个新方法。
【作者单位】： 山东省农业科学院畜牧兽医研究所山东省畜禽疫病防治与繁育重点实验室;
【关键词】： 新城疫病毒 shRNA P基因 慢病毒载体
【基金】：公益性行业(农业)科研专项(201303033,201003012) 现代农业产业技术体系建设专项资金(CARS-42-Z12)
【分类号】：S852.65
【正文快照】： 新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)属于副粘病毒科副粘病毒亚科腮腺炎病毒属,为不分节段负链RNA病毒[1]。NDV基因组长约15Kb[2-3],包含6个阅读框,基因排列方式为3′-NP-P-M-F-HN-L-5′[4],依次编码6种结构蛋白,即核衣壳蛋白(NP)、磷蛋白(P)、基质蛋白(M)、融合蛋白(F)，

本文编号：733722