小鹅瘟病毒快速检测试纸条的研制及其应用
发布时间：2017-08-27 13:18
本文关键词：小鹅瘟病毒快速检测试纸条的研制及其应用
【摘要】：小鹅瘟(Gosling Plague, GP)是由鹅细小病毒(Goose Parvovirus, GPV)弓起的雏鹅或雏番鸭的一种传播快、死亡率高、高度接触性急性或亚急性败血性传染病；主要侵害4-20日龄雏鹅和雏番鸭;以肠道栓塞为其特征性病变,是严重危害养鹅业发展的重要传染病之一琼脂扩散试验是检测GPV的传统方法,此方法操作简单、方便、快速且经济,适宜在基层推广和应用,但是灵敏度较低,对抗原抗体的要求比较高。近年来随着分子生物学技术的迅速发展,小鹅瘟的诊断技术也随之取得了一些进展,建立的方法主要包括聚合酶链式反应(PCR)和核酸探针技术。这些方法具有敏感性高、特异好等优点,但是也存在着一些局限性,例如需要特殊的仪器,高昂的经济代价等。本研究拟建立一种简单、方便、直观快速的胶体金检测方法来解决生产实践中所遇到的临床检测GPV的技术问题。1.胶体金的制备及粒径的选择本部分研究通过柠檬酸三钠还原氯金酸的方法分别制备了粒径分别为15nm、30nm和40nm的胶体金,并且分别摸索出其标记的最佳pH为7.44、7.61、8.66,最佳蛋白量为7.7μg/mL、8.8μg/mL、8.8μg/mL,成功制备了胶体金-抗体复合物。通过目测比较,透射电镜鉴定,最终筛选出pH7.61最佳蛋白量8.8μg/mL 30nm的胶体金为最佳粒径并应用于本研究试纸条的制备。2.胶体金试纸条性能的研究通过对胶体金试纸条的胶体金-抗体复合物的最佳喷量、金标垫的处理、NC膜T线和C线处理、封闭液的选择等工艺指标进行摸索并优化。最终确定最佳喷量1：1稀释,30μL/cm、用含0.1%Tween-20,0.3%BSA,4%蔗糖的PB溶液处理玻璃纤维素膜、NC膜T线C线2.0mg/mL的抗体,0.7μL/cm、封闭液为1%BSA封闭两个小时。特异性实验结果显示本研究制备的试纸条只与GPV反应,而与常见家禽H9亚型禽流感病毒(AIV-H9)、马立克氏病病毒(MDV)、新城疫病毒(NDV)和鸡贫血病病毒(CAV)等没有交叉反应,具有良好的特异性：试纸条的检测灵敏度用小鹅瘟病毒尿囊液完成。用病毒滴度为3.3x104.1LD50/ml的尿囊液作为检测原时,本试纸条可以检测到约80个LD50;试纸条批内、批间重复性良好,同时将其抽真空并置于4℃保存六个月时,其灵敏度、特异性等性能无明显变化。3.试纸条的临床应用收集临床疑似发病的雏鹅,天鹅,樱桃谷鸭的病料,初步应用本研究制备的试纸条进行GPV抗原检测,并与病毒分离的方法进行同步对比实验。实验结果表明,该试纸条与病毒分离的符合率为87.9%。
【关键词】：小鹅瘟病毒 快速检测 胶体金试纸条
【学位授予单位】：扬州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S852.65
【目录】：
- 摘要3-5
- Abstract5-8
- 符号说明8-10
- 文献综述10-23
- 第一章 小鹅瘟流行现状及检测方法研究进展10-17
- 第二章 胶体金免疫层析检测技术研究进展17-23
- 研究内容一、胶体金的制备及最佳粒径的选择23-32
- 1 材料23-24
- 2 方法24-26
- 3 结果26-30
- 4 讨论30-32
- 研究内容二、小鹅瘟抗原快速检测试纸条的制备及其性能的研究32-44
- 1 材料32-33
- 2 方法33-35
- 3 结果35-42
- 4 讨论42-44
- 研究内容三、小鹅瘟抗原检测试纸条的临床应用44-47
- 1 材料44
- 2 方法44-45
- 3 结果45-46
- 4 讨论46-47
- 全文总结47-48
- 参考文献48-55
- 攻读学位期间发表的学术论文55-56
- 致谢56-57
【参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 涂飞;宋娜;石亚运;吕亚楠;邵红霞;钱琨;金文杰;秦爱建;;1株鹅细小病毒强毒株的分离与鉴定[J];河南农业科学;2014年12期
2 金文杰;吕亚楠;王芳;朱良全;秦爱建;丁家波;;我国小鹅瘟研究进展及成就[J];微生物学通报;2014年03期
3 郭卉;涂飞;吕亚楠;史荣华;金文杰;邵红霞;钱琨;秦爱建;;抗鹅细小病毒单克隆抗体的制备及其免疫荧光检测方法的建立[J];中国动物传染病学报;2013年04期
4 龚云飞;陈宗伦;奚茜;李沐洁;王唯芬;王e，
本文编号：745637
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