H9亚型禽流感病毒和禽肺病毒二重RT-PCR检测方法的建立

发布时间：2017-08-28 23:25

  本文关键词：H9亚型禽流感病毒和禽肺病毒二重RT-PCR检测方法的建立

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【摘要】：根据GenBank中H9亚型禽流感病毒HA基因和禽肺病毒F基因的保守序列,通过Blast进行比对,在各自保守的基因序列中分别设计了两对特异性扩增引物,引物扩增的片段大小分别为569bp和424bp,应用这两对引物建立了H9亚型禽流感病毒和禽肺病毒的二重RT-PCR检测方法,对建立的方法进行了特异性试验、敏感性试验和临床样品验证。对检测为阳性的样品进行克隆和序列分析,以验证本方法的准确性。特异性试验结果表明,所有参试的H9亚型禽流感病毒都能扩增出大小为569bp的片段,参试的禽肺病毒毒株扩增出424bp的片段,没有其他条带出现,而对照的参试毒株在569bp和424bp处没有任何条带;敏感性试验结果表明,本试验建立的方法能检测到10pg的H9亚型禽流感病毒和禽肺病毒RNA模板。应用本试验建立的方法对广西采集的病鸡样品132份进行检测,H9亚型禽流感病毒阳性的样品有6份,禽肺病毒阳性的样品2份;随机各挑取2份H9亚型禽流感病毒和禽肺病毒阳性PCR产物进行克隆和序列分析,经比对分析,2份H9亚型禽流感病毒阳性PCR产物与H9亚型禽流感病毒(No.JF715045.1)100%同源,2份禽肺病毒阳性PCR产物与禽肺病毒株(No.AF187154)100%同源。本试验建立的H9亚型禽流感病毒和禽肺病毒二重RT-PCR检测方法具有特异、敏感、快速的特点,可以用于临床快速准确检测H9亚型禽流感病毒和禽肺病毒。
【作者单位】： 广西壮族自治区兽医研究所广西动物疫病病原生物学与诊断重点实验室;
【关键词】： H亚型禽流感病毒 禽肺病毒 二重反转录-聚合酶链反应 检测
【基金】：广西科技厅专项(桂科AD16380009,桂科合14123001-8,桂科重14121003-4-2,桂科专项16-1) 广西自然科学基金项目(2013GXNSFDA019015) 国家万人计划领军人才专项(2016-37)
【分类号】：S852.65
【正文快照】： H9亚型禽流感病毒(Avian influenza virus H9subtype,AIV H9)和禽肺病毒(Avian pneumovir-us,APV)是危害养鸡业的两种重要病毒,H9亚型禽流感病毒属正黏病毒科A型流感病毒属,病毒基因组为分节段的单股负链RNA,包含HA、NA、M、PB1、PB2、NP、PA、NS 8个基因组[1]。禽肺病毒属于

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本文编号：750100