黄体期与卵泡期肉牛阴道菌群结构的比较研究

发布时间：2017-08-29 00:01

  本文关键词：黄体期与卵泡期肉牛阴道菌群结构的比较研究

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【摘要】：很多研究表明,牛阴道菌群对牛生殖道健康起着至关重要的作用,目前,有关肉牛阴道菌群结构的报道还较少,本研究应用变性梯度凝胶电泳(denaturing gradient gel electrophoresis,DGGE)及荧光定量PCR(Real-time PCR)对肉牛黄体期与卵泡期阴道菌群进行研究,比较分析肉牛不同生理时期阴道微生物结构差异和种群数量变化。本文研究的主要结论如下:1、利用PCR-DGGE技术明确肉牛阴道菌群结构并比较黄体期和卵泡期的差异。选择7头肉牛,分别采集黄体期和卵泡期阴道分泌物,提取细菌总DNA,采用巢式PCR对细菌16S rDNA的V3区进行扩增,将PCR产物进行DGGE。对DNA指纹图谱特异性条带切胶回收并进行克隆测序,通过BLAST与已知序列对比,鉴定细菌菌种,分析比较黄体期和卵泡期肉牛阴道菌群结构。结果表明,健康肉牛阴道内存在阴道气球菌(Aerococcus vaginalis str.)、绿色气球菌(Aerococcus viridans str.)、睡眠嗜血杆菌(Haemophilus somnus str.)、多动物链球菌(Streptococcus pluranimalium str.)、嗜冷杆菌(Psychrobacter marincola str.)、大肠杆菌(Escherichia coli O157:H7 str.)和鞘氨醇单胞菌(Sphingomonas roseiflava str.)等。2、为明确肉牛黄体期与卵泡期阴道菌群结构差异,本研究应用荧光定量PCR技术检测了健康肉牛黄体期和卵泡期阴道主要细菌的数量。选取7头健康肉牛,分别采集黄体期和卵泡期阴道分泌物,提取细菌总DNA,根据DGGE克隆测序结果,选择5种特异性细菌,即:大肠杆菌、鞘氨醇单胞菌、链球菌属、乳酸杆菌属和睡眠嗜血杆菌。利用荧光定量PCR技术检测各细菌数量。结果表明,总菌、大肠杆菌、鞘氨醇单胞菌和睡眠嗜血杆菌菌群数量在两组间无显著差异(P0.05),但黄体期链球菌属数量显著高于卵泡期(P0.01),卵泡期乳杆菌属数量显著高于黄体期(P0.05)。结果提示,肉牛黄体期与卵泡期的阴道菌群结构存在显著差异。本研究利用分子生物学技术研究了肉牛黄体期和卵泡期阴道菌群结构,明确了二者间的差异,鉴定出健康肉牛阴道主要菌群,定量分析不同生理时期阴道菌群数量差异,研究结果不仅为揭示发情周期对肉牛阴道菌群的影响及机制奠定了基础,而且也为开发新型微生态机制提供了参考。
【关键词】：肉牛 黄体期 卵泡期 阴道 PCR-DGGE Real-time PCR 菌
【学位授予单位】：吉林农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S823
【目录】：

• 摘要3-4
• Abstract4-7
• 引言7-9
• 第一篇 文献综述9-18
• 1 生殖道微生物多样性的研究方法9-12
• 2 牛生殖道菌群的研究现状与进展12-16
• 3 研究目的与意义16-18
• 第二篇 研究内容18-46
• 第一章 黄体期与卵泡期肉牛阴道内菌群种类分析18-32
• 1.1 材料18-19
• 1.2 方法19-25
• 1.3 结果25-30
• 1.4 讨论30-31
• 1.5 小结31-32
• 第二章 黄体期与卵泡期肉牛阴道菌群结构的定量分析32-45
• 2.1 材料32
• 2.2 方法32-35
• 2.3 结果35-43
• 2.4 讨论43-44
• 2.5 小结44-45
• 第三章 结论45-46
• 参考文献46-51
• 作者简介51-52
• 致谢52

【参考文献】

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本文编号：750183