益生屎肠球菌HDRsEf1抗ETEC肠道感染作用的研究
本文关键词:益生屎肠球菌HDRsEf1抗ETEC肠道感染作用的研究
更多相关文章: 屎肠球菌 ETEC 肠道炎症 肠道屏障 紧密连接蛋白 OCLN
【摘要】:产肠毒素大肠杆菌(Enterotoxigenic Escherichia,ETEC)是引起动物和人体腹泻的重要病原菌之一,严重影响畜禽养殖业的生产效益。屎肠球菌(Enterococcus faecium)被认为是具有益生功能的肠道有益菌群,本实验以分离自健康仔猪粪便且具有良好益生功能的菌株-屎肠球菌HDRsEf1为研究对象,分析其对ETEC肠道感染的保护作用机制,为HDRsEf1应用于防控动物肠道感染性疾病提供理论基础和技术支持。首先采用ETEC感染小鼠为实验模型,研究了HDRsEf1对ETEC肠道感染的保护作用。实验将40只ICR小鼠随机分为4组,对照组:每天灌胃PBS;预防组:攻毒前10 d每天均为HDRsEf1菌液,第11 d给予单剂量的ETEC攻毒,第12~21 d灌胃PBS;模型组:第11 d给予单剂量ETEC攻毒,第1~10 d和12~21 d均灌胃PBS;治疗组:第1~10 d灌胃PBS,第11 d灌胃ETEC攻毒,第12~21 d每天均为HDRsEf1。其次通过ETEC体外感染小鼠空肠上皮细胞(MODE-K)实验,初步研究了HDRsEf1调控OCLN的分子机制。试验结果及结论如下:腹泻率、体重变化:ETEC攻毒后3 d,模型组腹泻率为66.7%,小鼠体重为24.30±0.18 g相比于对照组25.2±0.49 g显著下降(P0.05),预防组小鼠腹泻率为33.3%低于模型组;攻毒后10 d,预防组小鼠体重为27.77±0.25 g相比于模型组25.57±0.57 g(P0.05)差异显著,治疗组小鼠腹泻率为16.7%相比于模型组(50%)显著降低(P0.05),治疗组平均体重为27.50±0.26 g显著高于模型组(P0.05)。肠道炎症变化:ETEC攻毒后1 d,模型组炎症评分结果为2.08±0.38(高于2分判定为中度炎症)而预防组为1.50±0.25(低于2分);攻毒后10 d,预防组炎症评分结果为1.50±0.43显著低于模型组2.50±0.43(P0.05),治疗组为2.0±0.25。攻毒后1 d,模型组小鼠空肠组织IL-1β、TNF-α、IFN-γ表达上升(P0.05),IL-10表达下降(P0.05),与模型组相比预防组IL-1β、TNF-α、IFN-γ表达下降(P0.05),IL-10表达升高(P0.05);攻毒后10 d,治疗组下调了TNF-α和IFN-γ的表达(P0.05),上调了IL-10的表达(P0.05)。肠道化学屏障变化:ETEC攻毒后1 d,模型组空肠IgA阳性B细胞数和MUC-2、LYZ-2表达显著降低(P0.05),与模型组相比预防组空肠IgA阳性B细胞数和MUC-2、LYZ-2表达均显著升高(P0.05);攻毒后10 d,与模型组相比预防组空肠IgA阳性B细胞数和MUC-2、LYZ-2表达显著升高(P0.05),治疗组空肠IgA阳性B细胞数和MUC-2表达也显著升高(P0.05)。肠道紧密连接蛋白表达变化:分别从mRNA水平和蛋白水平分析了HDRsEf1对ETEC感染小鼠空肠OCLN、ZO-1表达的影响,ETEC攻毒后1 d模型组OCLN表达下调(P0.05),ZO-1的表达没有明显变化,预防组OCLN表达升高(P0.05);攻毒后10 d,预防组和治疗组显著上调了OCLN的表达(P0.05)。HDRsEf1调控OCLN的分子机制:细胞感染实验证实HDRsEf1能够拮抗ETEC对OCLN的下调,变化趋势与动物实验结果一致;OCLN启动子荧光素酶表达载体转染细胞实验证实HDRsEf1能够显著拮抗ETEC对OCLN启动子活性的抑制(P0.05);RNA干扰实验证实HDRsEf1通过激活TLR-2和PI3K相关信号通路调控OCLN的表达。综上所述,HDRsEf1能够降低ETEC感染小鼠腹泻率、缓解体重减轻,减轻肠道炎症反应,增强肠道屏障功能;HDRsEf1可从转录水平调控OCLN的表达,且HDRsEf1可通过激活TLR-2和PI3K相关信号通路调控OCLN的表达。
【关键词】:屎肠球菌 ETEC 肠道炎症 肠道屏障 紧密连接蛋白 OCLN
【学位授予单位】:华中农业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2016
【分类号】:S855
【目录】:
- 摘要6-8
- Absract8-10
- 缩略词(Abbreviation)10-11
- 1 文献综述11-20
- 1.1 产肠毒素大肠杆菌的相关研究11-13
- 1.1.1 产肠毒素大肠杆菌的致病机理11-12
- 1.1.2 产肠毒素大肠杆菌感染对机体肠道的影响12-13
- 1.1.3 产肠毒素大肠杆菌感染的防治方法13
- 1.2 益生菌益生作用概述13-17
- 1.2.1 益生菌的概念13-14
- 1.2.2 益生菌的益生特性14-17
- 1.3 屎肠球菌益生功能研究进展17-18
- 1.3.1 屎肠球菌的生物学特性17
- 1.3.2 屎肠球菌的益生功能17-18
- 1.4 益生菌研究及应用前景18-20
- 2 本研究的目的与意义20-21
- 3 材料与方法21-32
- 3.1 实验材料21-23
- 3.1.1 菌株、载体、实验动物和细胞系21
- 3.1.2 主要试剂及试剂盒21-22
- 3.1.3 主要溶液的配制22
- 3.1.4 主要仪器设备22-23
- 3.2 实验方法23-32
- 3.2.1 ETEC小鼠感染实验23
- 3.2.2 小鼠体重与腹泻率统计23-24
- 3.2.3 小鼠小肠病理切片与病理评分24
- 3.2.4 小鼠肠道化学屏障相关基因表达测定24-26
- 3.2.5 小鼠肠道炎症因子与抗炎症因子测定26-27
- 3.2.6 小鼠肠道紧密连接蛋白检测27-29
- 3.2.7 HDRsEf1调控OCLN的分子机制实验29-31
- 3.2.8 统计学分析31-32
- 4 结果与分析32-42
- 4.1 HDRsEf1对ETEC感染小鼠腹泻率和体重的影响32
- 4.2 HDRsEf1对ETEC感染小鼠肠道炎症的影响32-34
- 4.3 HDRsEf1对ETEC感染小鼠肠道化学屏障的影响34-35
- 4.4 HDRsEf1对ETEC感染小鼠空肠紧密连接蛋白表达的影响35-36
- 4.5 HDRsEf1调控OCLN的分子机制研究36-42
- 4.5.1 体外实验验证HDRsEf1对OCLN的保护作用36-37
- 4.5.2 HDRsEf1调控OCLN的途径研究37-39
- 4.5.3 HDRsEf1调控OCLN信号通路研究39-42
- 5 讨论42-46
- 5.1 HDRsEf1对ETEC感染小鼠腹泻率和体重的影响42
- 5.2 HDRsEf1对ETEC感染小鼠肠道炎症的影响42-43
- 5.3 HDRsEf1对ETEC感染小鼠肠道化学屏障的影响43
- 5.4 HDRsEf1对ETEC感染小鼠肠道紧密连接蛋白表达的影响43-44
- 5.5 HDRsEf1调控OCLN分子机制研究44
- 5.6 HDRsEf1防治大肠杆菌肠道感染的展望44-46
- 6 结论46-47
- 参考文献47-54
- 附录54-57
- 致谢57
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 汤赛冬;成建忠;;仔猪ETEC F4受体研究进展[J];上海畜牧兽医通讯;2009年05期
2 王春江;赵献军;赵宝;郝艳阳;齐雪峰;;陕西省致仔猪腹泻ETEC的分子流行病学调查[J];西北农林科技大学学报(自然科学版);2010年07期
3 程法稷,曾广达,,郑荔红,梁爱民,林成水;莆田市部分畜禽感染ETEC的调查研究[J];福建农业科技;1994年03期
4 曾群辉,张冰,陈明勇,崔文涛;牦牛ETEC灭活疫苗的研制及免疫效力试验[J];中国预防兽医学报;2001年03期
5 陈曦;赵兴华;俞伏松;杨金先;宋铁英;;适用于蛋鸡免疫的猪源ETEC菌毛蛋白佐剂的筛选[J];福建畜牧兽医;2013年04期
6 刘纯杰;核酸探针技术在检测ETEC各种毒力致病因子中的应用[J];中国畜禽传染病;1996年04期
7 李晓宇;甄宇红;金礼吉;徐永平;;产肠毒素大肠杆菌(ETEC)的两种抗原制品对蛋鸡免疫原性的对比研究[J];中国免疫学杂志;2006年11期
8 周虹;朱军;朱国强;;动物源产肠毒素大肠杆菌(ETEC)黏附素研究进展[J];微生物学报;2012年06期
9 由昭红;姜中其;王娜;孙建华;吕美儿;;抗ETEC F18~+菌毛特异性IgY的稳定性研究[J];中国兽药杂志;2006年02期
10 张石磊;芮晗;;ETEC刺激后猪细胞系细胞因子mRNA的表达情况[J];四川畜牧兽医;2009年01期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 晏学明;任军;黄翔;彭秋玲;唐欢;王怡仲;张波;季华员;黄路生;;利用大规模资源家系群体定位和鉴别猪ETEC F4受体基因[A];湖北省遗传学会、江西省遗传学会2006年学术年会暨学术讨论会论文摘要集[C];2006年
2 马永平;宋方洲;罗耀玲;黄雪萍;;用双歧杆菌构建ETEC LTB口服活疫苗[A];2011新型疫苗与抗体创制关键技术及质量控制研讨会论文集[C];2011年
3 闻晓波;崔玉东;朴范泽;;ETEC致病因子F_(41)、K_(99)菌毛的检测及分析[A];中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会成立20周年庆典暨第十次学术研讨会论文集(下)[C];2003年
4 张雪寒;何孔旺;张书霞;华荣虹;;ETEC肠毒素基因多重PCR检测方法的建立[A];中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会成立20周年庆典暨第十次学术研讨会论文集(上)[C];2003年
5 刘鑫;柳小春;蒋隽;黄生强;施启顺;;中外猪种微卫星标记与肠毒素大肠杆菌(ETEC)F4受体黏附表型关系的研究[A];中国畜牧兽医学会2006学术年会论文集(上册)[C];2006年
6 卫广森;许崇波;孙宇;;新生仔猪大肠杆菌性腹泻病原(ETEC)致病因子研究进展[A];第六届全国会员代表大学暨第11次学术研讨会论文集(上)[C];2005年
7 卫广森;许崇波;孙宇;;新生仔猪大肠杆菌性腹泻病原(ETEC)致病因子研究进展[A];中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第六届全国会员代表大会暨第11次学术研讨会论文集[C];2005年
8 Chunlan Xu;Youming Wang;Rui Sun;Xiangjin Qiao;Xiaoya Shang;Weining Niu;;Modulatory Effects of Vasoactive Intestinal Peptide on Intestinal Mucosal Immunity and Microbial Community of Weaned Piglets Challenged by an Enterotoxigenic Escherichia coli(K88)[A];中国生物化学与分子生物学会第十一次会员代表大会暨2014年全国学术会议论文集——专题报告三[C];2014年
9 陈祥;高崧;潘志明;焦新安;刘秀梵;;猪源ETEC、STEC、AEEC的病原生物学特性[A];中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第三届猪病防控学术研讨会论文集[C];2008年
10 蒋隽;柳小春;何俊;黄生强;马海明;;猪ETEC F4受体微卫星标记筛选[A];第十二次全国畜禽遗传标记研讨会论文集[C];2010年
中国重要报纸全文数据库 前1条
1 继;ProdiGene 开始ETEC疫苗的临床试验[N];医药经济报;2002年
中国博士学位论文全文数据库 前6条
1 刘鑫;猪肠毒素大肠杆菌(ETEC)F4受体相关候选基因的筛选与表达研究[D];湖南农业大学;2008年
2 季华员;猪产肠毒素型大肠杆菌F41受体基因的精细定位与鉴别[D];江西农业大学;2011年
3 蒋隽;猪ETEC F4受体相关基因及其相关SNP筛选的研究[D];湖南农业大学;2007年
4 朱晶;产肠毒素大肠杆菌、肠上皮细胞和乳酸菌相互关系的研究[D];上海交通大学;2011年
5 陈书霞;ETEC定居因子CS3对胡萝卜的转化及肠毒素LTB-ST病毒表达载体的构建[D];西北农林科技大学;2003年
6 周梦舟;以秀丽隐杆线虫筛选抑制产肠毒大肠杆菌的益生菌及其作用机理[D];江南大学;2014年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 王涛;生鲜猪肉中产肠毒素大肠杆菌多重PCR检测方法研究[D];西北农林科技大学;2015年
2 晏涛;益生屎肠球菌HDRsEf1抗ETEC肠道感染作用的研究[D];华中农业大学;2016年
3 谭君;重组ETEC K88干酪乳杆菌口服液的研制及其临床效果的初步研究[D];黑龙江八一农垦大学;2012年
4 赵鹏;牛ETEC K99菌毛抗体间接ELISA检测方法的建立[D];黑龙江八一农垦大学;2008年
5 陈一杰;ETEC F4ac易感和抗性猪只小肠差异蛋白的鉴别[D];江西农业大学;2011年
6 赵兴华;适用于蛋鸡免疫的猪源ETEC菌毛蛋白疫苗佐剂的筛选[D];福建农林大学;2012年
7 魏春华;ETEC K99基因工程乳酸菌的制备及其免疫效果的检测[D];黑龙江八一农垦大学;2009年
8 张雪寒;ETEC肠毒素基因多重PCR检测和热敏肠毒素的克隆与表达[D];南京农业大学;2003年
9 王芳;ETEC肠毒素SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR检测方法的建立[D];西北农林科技大学;2011年
10 齐浩;ETEC 987P基因工程乳酸菌的制备及其免疫效果的检测[D];黑龙江八一农垦大学;2014年
本文编号:751668
本文链接:https://www.wllwen.com/yixuelunwen/dongwuyixue/751668.html