抗大肠杆菌复方中药的筛选及其对大肠杆菌感染小鼠肠道结构和微生物的影响

发布时间：2017-08-30 00:45

  本文关键词：抗大肠杆菌复方中药的筛选及其对大肠杆菌感染小鼠肠道结构和微生物的影响

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【摘要】：大肠杆菌病是由某些血清型的致病性大肠埃希氏菌,简称大肠杆菌所引起的传染病,可引起多种动物发病,仔猪主要表现为仔猪白痢和仔猪黄痢,鸡临床表现为多种症型,较常见的有肉芽肿、肝周炎、败血症、心包炎、肠炎、气囊炎等,常给养殖业带来巨大经济的损失。目前,大肠杆菌病的防治还比较困难,主要因其血清型众多,现有的疫苗不能有效预防。在治疗时由于抗生大量使用,导致耐药性的产生,使治疗效果不佳,若是加大治疗剂量或是延长治疗时间使得抗生素残留在肉蛋等产品中,形成有害残留,危害食品安全。因此研发更加安全且有效的中药制剂并阐明其作用机理将具有重要的理论研究与临床应用价值。本课题选用三组复方中药采用水煎法制备水提物,进行药敏试验及最小抑菌浓度的体外测定,筛选对大肠杆菌抑菌作用较好的组方。采用人工诱发小鼠大肠杆菌病的病理模型,进行复方中药对小鼠大肠杆菌病的疗效研究,以选择培养基培养空肠菌群并观察复方中药对小鼠空肠内的双歧杆菌、乳酸杆菌、肠杆菌和肠球菌数量的影响,并观察十二指肠、空肠小肠黏膜厚度和绒毛长度及杯状细胞的分布及其数量的变化。进一步用荧光定量PCR检测黏膜免疫相关指标Muc2和Muc3的表达量。结果如下：1、抑制大肠杆菌的复方中药筛选结果表明,三种复方中药对两株大肠杆菌均有不同程度的抑制作用,其中,复方中药一抑菌直径最大,且MIC最小。2、成功建立大肠杆菌感染小鼠模型,模型组小鼠菌群失衡,肠杆菌、肠球菌数量极显著升高,乳酸杆菌和双歧杆菌数量极显著降低(P0.01)：肠黏膜绒毛断裂,肠上皮细胞出现坏死和脱落;杯状细胞数量减少；Muc2、Muc3 mRNA水平与正常小鼠相比极显著降低(P0.01)。复方中药组小鼠菌群基本恢复,与空白组小鼠空肠菌群无显著差异(P0.05);与模型组相比,肠道黏膜形态得到较好改善;Muc2、Muc3 mRNA表达水平有极显著的升高(P0.01)。恩诺沙星组小鼠菌群肠杆菌和肠球菌数量减少,与空白组小鼠肠道菌群无显著差异(P0.05),乳酸杆菌和双歧杆菌的数量依旧与空白组有极显著的差异(P0.01);与模型组相比,肠道黏膜形态略有改善；Muc2、Muc3 mRNA水平有极显著的升高(P0.01),但与空白组小鼠相比,差异仍显著(P0.01)。本试验证实：复方中药具有抗大肠杆菌感染的作用,并阐明了其抗大肠杆菌作用的部分机制,为大肠杆菌的防止提供了新的途径,也为该复方的开发利用奠定了基础。
【关键词】：试验动物小鼠 大肠杆菌 复方中药 恩诺沙星 肠道微生物 黏膜修复
【学位授予单位】：山西农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S859.7
【目录】：

• 摘要6-8
• 文献综述8-14
• 1 大肠杆菌病研究进展8-13
• 1.1 病原学8
• 1.2 大肠杆菌病的临床症状8-9
• 1.3 ETEC的致病机制9-12
• 1.4 大肠杆菌病的防治12-13
• 2 本研究的目的与意义13-14
• 试验研究14-32
• 1 试验材料14-16
• 1.1 菌种14
• 1.2 试验动物14
• 1.3 中药14
• 1.4 试剂与药品14-15
• 1.5 主要仪器设备15-16
• 2 试验方法16-21
• 2.1 中药液的制备16
• 2.2 对大肠杆菌的抑制作用16
• 2.3 复方中药对大肠杆菌的MIC测定16
• 2.4 大肠杆菌半数致死量(LD_(50))测定16-17
• 2.5 动物分组17
• 2.6 临床观察及记录17-18
• 2.7 采样18
• 2.8 肠道菌群选择培养18
• 2.9 HE染色18-19
• 2.10 甲苯胺蓝染色19
• 2.11 基因表达的检测19-21
• 3 试验结果与分析21-28
• 3.1 复方中药对大肠杆菌的抑制作用21-22
• 3.2 复方中药对2株大肠杆菌的MIC22
• 3.3 大肠杆菌半数致死量确定22-23
• 3.4 治疗试验结果23
• 3.5 各组小鼠肠道菌群的变化23-24
• 3.6 各组小鼠十二指肠和空肠绒毛长度和黏膜厚度的变化24-25
• 3.7 各组小鼠杯状细胞的变化25-26
• 3.8 各组小鼠基因表达的变化26-28
• 4 讨论28-32
• 4.1 中药的组方原则28-30
• 4.2 复方中药对大肠杆菌感染小鼠的肠道结构、功能和微生物的影响30-32
• 全文结论32-33
• 参考文献33-36
• Abstract36-38
• 英文缩略词对照表38-40
• 致谢40

【参考文献】

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本文编号：756365