猪TGEV HN-2012株ORF3a和ORF3b基因遗传变异分析及其真核表达研究

发布时间：2017-09-03 22:01

  本文关键词：猪TGEV HN-2012株ORF3a和ORF3b基因遗传变异分析及其真核表达研究

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【摘要】：【目的】研究猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)HN-2012株ORF3a和ORF3b基因的遗传变异情况。【方法】根据GenBank公布的猪传染性胃肠炎病毒ORF3a和ORF3b基因序列,分别设计合成1对特异性引物,通过RTPCR从猪传染性胃肠炎病毒HN-2012株的cDNA中扩增ORF3a和ORF3b基因,经克隆测序后,将其基因序列与NCBI中不同来源的TGEV毒株的相应序列进行同源性分析,构建系统进化树并进行遗传变异分析,然后将ORF3a和ORF3b基因亚克隆至真核表达载体,构建pCAGGS-ORF3a-flag和pCAGGS-ORF3b-flag载体,转染293T细胞进行表达,利用flag标签抗体对2个基因的蛋白表达情况进行Western blot分析。【结果】TGEV HN-2012株的ORF3a基因与其他毒株间核苷酸的同源性为92.6%~100%,ORF3b基因与其他毒株间核苷酸的同源性为98.6%~99.7%。Western blot结果表明,ORF3a蛋白和ORF3b蛋白的分子质量约为8ku和28ku。【结论】TGEV HN-2012株的ORF3a基因与CH/JLY2/08、CH/HLJH/08株等亲缘关系较近,ORF3b基因与TS株、Miller M6株等亲缘关系较近,与我国其他毒株关系较远;成功实现了ORF3a和ORF3b蛋白在293T细胞中的表达。
【作者单位】： 河南农业大学牧医工程学院;河南省动物性食品安全重点实验室;
【关键词】： TGEV河南分离株(HN-) ORFa和ORFb基因 T细胞 真核表达
【基金】：国家自然科学基金项目“Ⅰ型干扰素在TGEV与树突状细胞相互作用中的免疫功能及调控机制研究”(31101796) 河南省基础与前沿技术研究计划项目“猪传染性胃肠炎病毒感染对ST细胞免疫生物学特性的影响”(112300410161)
【分类号】：S852.65
【正文快照】： Genetic variation and eukaryotic expression of ORF3aandORF3bfrom porcine TGEV HN-2012 strain猪传染性胃肠炎病毒(Porcine transmissiblegastroenteritis virus,TGEV)属冠状病毒科冠状病毒属成员,可导致猪传染性胃肠炎(Transmissiblegastroenteritis,TGE)。TGE是猪的一

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本文编号：787563