奶牛舍空气微生物快速计数培养基的设计与优化

发布时间：2017-09-04 18:28

  本文关键词：奶牛舍空气微生物快速计数培养基的设计与优化

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【摘要】：中国在乳制品生产食用方面位于世界前列,但近些年来,乳制品安全问题发生日益频繁,其中,微生物污染是原料奶生产过程中重要的污染源,不仅对乳制品质量和奶牛本身健康造成影响,更对我国消费者人身健康存在重大威胁,因而原料奶生产过程中的质量和安全日益受到企业和研究人员的关注。为保障原料奶卫生健康安全,提高微生物计数检测速率,缩短微生物计数时间。本课题针对哈尔滨周边奶牛场配合微生物空气采样器进行四季空气采样,并采用基质辅助激光解析飞行时间质谱法进行鉴定,鉴定结果得出四季检出率最高的致病菌分别属于芽孢杆菌属(Bacillus):枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus);肠球菌属(Enterococcus):粪肠球菌(Enterococcus faecalis)、屎肠球菌(Enterococcus faecium);葡萄球菌属(Staphylococcus):木糖葡萄球菌(Staphylococcus xylosus)、产色葡萄球菌(Staphylococcus chromogenes);不动杆菌属(Acinetobacter):洛菲不动杆菌(Acinetobacter lwoffii)、鲍曼不动杆菌(Acinetobacter baumannii);棒状杆菌属(Corynebacterium):结膜干燥棒状杆菌(Corynebacterium xerosis)。所得结果与国内外研究报道基本相一致。本研究以这9种代表性致病菌为研究对象,参考国内外计数培养基营养成分在普通营养琼脂培养基基础上添加酵母浸出粉及葡萄糖,并用胰蛋白胨替代蛋白胨,制成基底培养基。优化后基底培养基配比为:胰蛋白胨10g/L,葡萄糖13g/L,酵母浸出粉10g/L,牛肉膏3g/L,Na Cl 5g/L。在基底培养基基础上用涂布计数法筛选出促代表菌共同生长的营养物质:甘露醇、丙酮酸钠、硫酸镁、生物素及西红柿汁。单因素法确定各促生长物质的适宜浓度范围,再采用响应面设计方法对比促生长物质之间关系,优化各促生长物质浓度,最终确定培养基配比制成快速计数培养基,从而缩短空间微生物的计数时间并提高计数效率。快速计数培养基添加促生长物质结果为:甘露醇、硫酸镁、丙酮酸钠、生物素及西红柿汁。以此培养基对代表菌采用涂布计数方法,恒温培养10h可计数,菌落计数可达1.28×109CFU/m L。应用其与空气采样器配合使用,奶牛场实际采回样品培养24h即可计数,与常规48h计数比较无差异,且为NA培养基计数时间的一半。达到了快速计数的目的,填补国内外空间微生物快速计数的空白,为实现微生物质量安全快速检测提供依据。
【关键词】：培养基 计数 促生长 响应面优化
【学位授予单位】：东北农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S852.6
【目录】：

• 摘要8-9
• 英文摘要9-11
• 1 前言11-19
• 1.1 空气微生物对乳制品安全的影响12-13
• 1.1.1 空气微生物在原料奶生产过程中的污染12
• 1.1.2 空气微生物在原料奶加工过程中的污染12-13
• 1.2 奶牛舍空气微生物概述13-17
• 1.2.1 奶牛舍空气微生物种类13-14
• 1.2.2 奶牛舍空气微生物常见计数方法14-15
• 1.2.3 奶牛舍空气微生物计数培养基15-17
• 1.3 研究的目的与意义17
• 1.4 研究的内容及创新之处17-19
• 2 材料与方法19-27
• 2.1 材料19-20
• 2.1.1 菌株19
• 2.1.2 试剂19
• 2.1.3 培养基19-20
• 2.1.4 主要仪器与设备20
• 2.2 方法20-27
• 2.2.1 奶牛舍空气代表性微生物的筛选20-22
• 2.2.2 菌种保存与保藏22
• 2.2.3 代表菌在不同培养基的对比生长研究22-23
• 2.2.4 基底培养基设计与优化23-24
• 2.2.5 促生长物质的筛选24-25
• 2.2.6 响应面设计实验25-26
• 2.2.7 废弃培养基的处理26
• 2.2.8 实际应用对比26-27
• 3 结果与分析27-70
• 3.1 奶牛舍空气微生物选择27
• 3.2 代表菌在不同培养基的对比生长研究27-31
• 3.2.1 适宜稀释浓度的筛选27-28
• 3.2.2 各菌在培养基的生长情况28-31
• 3.3 基底培养基设计与优化31-35
• 3.3.1 葡萄糖浓度的优化31-32
• 3.3.2 酵母浸出粉浓度的优化32-33
• 3.3.3 胰蛋白胨浓度的优化33
• 3.3.4 正交实验设计与优化33-35
• 3.4 营养物质的筛选35-57
• 3.4.1 甘露醇35-37
• 3.4.2 硫酸镁37-40
• 3.4.3 丙酮酸钠40-42
• 3.4.4 甘氨酸42-44
• 3.4.5 硝酸镧44-47
• 3.4.6 生物素47-49
• 3.4.7 土豆汁49-51
• 3.4.8 西红柿汁51-54
• 3.4.9 小结54-57
• 3.5 响应面设计实验57-70
• 3.5.1 单因素实验57-60
• 3.5.2 响应面设计实验60-66
• 3.5.3 实际应用对比66-70
• 4 讨论70-72
• 4.1 代表菌在不同培养基对比生长研究70
• 4.2 基底培养基设计与优化70
• 4.3 促生长物质的筛选70-71
• 4.4 响应面实验71
• 4.5 实际应用对比71-72
• 5 结论72-73
• 致谢73-74
• 参考文献74-79
• 攻读硕士学位期间发表的学术论文79

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本文编号：793153