PPV和PRV诊断方法的建立及PPV-PRV二联灭活疫苗免疫效力试验

发布时间：2017-09-08 06:01

  本文关键词：PPV和PRV诊断方法的建立及PPV-PRV二联灭活疫苗免疫效力试验

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【摘要】：猪细小病毒病和伪狂犬病都是引起母猪繁殖障碍的主要疾病。猪细小病毒病是由猪细小病毒(Porcine Parvovirus,PPV)引起的,猪伪狂犬病是由伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus,PRV)引起的。这两种疾病在世界范围内广泛分布,给养猪业造成巨大的经济损失。为了有效预防这两种疾病,本试验建立了检测PPV和PRV的TaqMan荧光定量PCR方法以及检测PPV抗体的ELISA方法,并利用猪细小病毒BQ-C株和猪伪狂犬病毒ΔgE株,试制了PPV-PRV二联灭活疫苗,对试制的疫苗免疫效力进行了初步试验。本研究针对PPV VP2基因和PRV gB基因序列,建立了检测PPV和PRV的TaqMan荧光定量PCR方法。结果表明所建立的TaqMan荧光定量PCR检测方法敏感性较高,特异性较好,批间、批内变异系数均小于3%,其中针对PPV VP2基因的荧光定量PCR方法可检测到13拷贝的初始模板,针对PRV gB基因的荧光定量PCR方法可检测到167拷贝的初始模板,敏感性是常规PCR方法的100倍。本研究利用杆状病毒载体表达系统表达VP2蛋白(rVP2)作为抗原,建立了检测PPV抗体的间接ELISA方法。经条件优化其最佳抗原包被浓度为10μg/mL,最佳酶标二抗稀释倍数为10000倍,最佳包被液为0.01mol/L碳酸盐缓冲液(PH=9.6),最佳封闭液为5%的脱脂乳-PBS,最佳封闭时间为90 min,最佳血清稀释倍数为200倍,其阳性Cut-off值为0.3。用该方法与商品化ELISA试剂盒分别检测360份临床血清样品,结果表明建立的ELISA方法检测PPV抗体阳性率为75.00%,商业化ELISA试剂盒检测PPV抗体阳性率为75.83%,二者符合率为94.17%。本研究利用本实验室保存的PPV-BQ-C毒株和rPRV-ΔgE毒株制备病毒液作为该二联疫苗的抗原,利用β-丙内酯将病毒液灭活,将上述灭活的两种病毒液以PPV-BQ-C，

本文编号：812285