L-聚组氨酸抑制LPS引起的猪精子凋亡及其对精液品质的影响

发布时间：2017-09-11 05:17

  本文关键词：L-聚组氨酸抑制LPS引起的猪精子凋亡及其对精液品质的影响

  更多相关文章： 精子 凋亡 L-聚组氨酸 多粘菌素B

【摘要】：猪精液液态保存是人工授精技术的基础,在精液液态保存过程中,精液中细菌溶菌产生的脂多糖(LPS)不仅能降低精液品质、缩短精子寿命、诱导精子凋亡,而且还能随着输精进入母畜生殖道内引起母畜生殖道免疫反应,造成生殖道免疫细胞极增而吞噬精子。L-聚组氨酸(L-pHis)能与LPS结合,但其能否抑制LPS对精子凋亡的影响尚未见报道。本研究中,通过向猪精液中添加L-pHis,检测其对猪精液细菌浓度、LPS浓度、精液品质是否造成影响,以及能否降低猪精子的凋亡率,并初步阐释其作用机制。研究中共收集24头公猪的精液,每4-5个个体的精液混合形成5个样本池(n=5),用BTS稀释液稀释至密度为4×106/mL,然后将精液液态保存(17℃)和37℃进行试验。首先在0、6、12、36、72、120h测定精液稀释后液态保存过程中精液中细菌菌落浓度以及精浆中LPS浓度随时间的变化；然后以稀释精液为对照组,分别添加多粘菌素B(PMB)至PMB浓度为100μg/mL为PMB组,L-聚组氨酸(L-pHis)至L-pHis为100μg/mL为L-聚组氨酸组,液态保存下于0、6、12、36、72、120h检测三个组中细菌浓度、LPS浓度、精液品质(精子活率、精子活力指数、运动速率)和精子的凋亡率,37℃保存下于0、1、3、6、9、12、24h检测三个组中精液品质(精子活率、精子活力指数、运动速率)和凋亡率;最后通过添加2μg/mL Anti-CD14于精液中,阻断LPS-TLR4的结合,初步阐释L-pHis抑制LPS诱导精子凋亡的作用机制。研究结果表明：(1)猪精液在液态保存过程中,细菌浓度从36h开始迅速增加,36h(4980±381.58 CFU/mL)、72h (12920±2833.66 CFU/mL)、120h(40020±4755.38 CFU/mL)细菌浓度持续显著增加(P0.05),细菌平均浓度达到1.02×104 CFU/mL;精液LPS浓度随保存时间无显著性变化(P0.05),其平均浓度达到4.70±0.21 EU/mL。(2)在精液稀释液中添加100μg/mL L-pHis或100μg/mL PMB对液态精液保存中LPS的浓度没有显著影响(P0.05),但是它们能提高在液态保存和37℃下精液品质(精子活力指数、精子速率、精子活率)和降低精液细菌浓度。(3)液态保存和37℃保存下在精液稀释液中添加100μg/mL L-pHis和100μg/mL PMB均能显著抑制精子凋亡(P0.05),但PMB抑制精子凋亡能力优于L-pHis(P0.05)。(4)L-pHis不能特异性清除精液中LPS,但是通过添加Anti-CD14或L-pHis后,LPS引起精子的凋亡率显著降低(P0.05),L-pHis可能通过与TLR4结合,阻断LPS诱导的精子凋亡途径,降低了精子的凋亡。结论：在精液液态保存中加入100μg/mL L-pHis能够有效提升精液品质,L-pHis能够阻断LPS诱导的精子凋亡从而降低精子凋亡率。
【关键词】：精子 凋亡 L-聚组氨酸 多粘菌素B
【学位授予单位】：四川农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S828
【目录】：

• 摘要8-10
• Abstract10-12
• 1 文献综述12-20
• 1.1 人工授精技术与精液液态保存12-13
• 1.2 精液中病原性微生物对精子的影响13-14
• 1.2.1 病原性微生物的来源及分类13
• 1.2.2 革兰氏阴性菌对精液质量的影响13-14
• 1.2.3 革兰氏阴性菌引起精子的凋亡14
• 1.3 精液品质评定指标14-16
• 1.3.1 常规指标15
• 1.3.2 精子凋亡指标15-16
• 1.4 精液中LPS对精子质量及母畜的影响16-18
• 1.4.1 LPS对精液品质的影响16
• 1.4.2 LPS引起母畜生殖道应急16-17
• 1.4.3 LPS-TLR4信号传导机制17-18
• 1.5 精液中清除LPS的研究进展18-19
• 1.5.1 PMB清除LPS的研究18
• 1.5.2 L-pHis清除LPS的研究18
• 1.5.3 壳聚糖与TLR4竞争性结合18-19
• 1.5.4 其它LPS-TLR4通路阻断剂19
• 1.6 研究目的与意义19-20
• 2. 材料和方法20-25
• 2.1 试验材料20-22
• 2.1.1 试验动物20
• 2.1.2 主要仪器设备20-21
• 2.1.3 药品及主要试剂的配制21-22
• 2.2 实验步骤22-24
• 2.2.1 精液的采集及稀释22
• 2.2.2 试验设计22-23
• 2.2.3 精液品质检测23-24
• 2.3 数据处理24-25
• 3 实验结果25-36
• 3.1 精液液态保存过程中细菌浓度的变化25
• 3.2 精液液态保存中LPS浓度的变化25-26
• 3.3 L-pHis和PMB对精液品质的影响26-33
• 3.3.1 L-pHis和PMB对精液中细菌增殖的影响26
• 3.3.2 L-pHis和PMB对精子活力的影响26-28
• 3.3.3 L-pHis和PMB对精子运动速率的影响28-30
• 3.3.4 L-pHis和PMB对精子活率的影响30-33
• 3.4 L-pHis和PMB对精子凋亡的影响33-35
• 3.5 L-pHis抑制猪精子凋亡的机制35-36
• 3.5.1 LPS浓度测定35
• 3.5.2 Anti-CD14抑制试验35-36
• 4 讨论36-41
• 4.1 BTS在猪精液液态保存中的应用36-37
• 4.2 影响猪精液液态保存的因素37
• 4.3 PMB对精液质量的影响37-39
• 4.4 PMB的抗凋亡作用39-40
• 4.5 L-pHis的抗凋亡作用40-41
• 5. 结论41-42
• 参考文献42-51
• 致谢51-52
• 攻读硕士期间发表文章52

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 李桂芳;贾晶;何晓英;;聚L-组氨酸/乙炔黑修饰电极上对乙酰氨基酚的电化学行为及测定[J];分析试验室;2015年08期

2 刘琦;苏泽智;王乐;冉舒文;李亚新;雷佳琦;胡亚美;曹师瑜;杨公社;胡建宏;;谷胱甘肽对猪精液常温保存效果的影响[J];畜牧与兽医;2015年06期

3 郝帅帅;黄阳;李平华;牛清;汪涵;黄瑞华;;我国猪冷冻精液技术的发展与现状分析[J];畜牧与兽医;2014年12期

4 卢顺;高其双;刘武;陈志华;向敏;周莉;彭霞;占才耀;童伟文;陶弼菲;王莲芳;夏瑜;华娟;喻婷;李杰;;鲎试剂检测乳品中内毒素浓度的研究[J];上海畜牧兽医通讯;2014年05期

5 高巍;陈帅;丁兆坤;许友卿;刘刚;印遇龙;;饲料中添加壳寡糖对动物机体的影响[J];动物营养学报;2014年02期

6 简选;于浩;金君;王毅;刘珍叶;齐广才;;聚L-组氨酸/石墨烯复合膜修饰电极对多巴胺和尿酸的同时测定[J];江西师范大学学报(自然科学版);2013年03期

7 黄诗伟;张明涛;张江涛;贺成龙;陈维琴;;猪人工授精技术[J];中国畜牧兽医文摘;2012年03期

8 邓英贤;郭继红;秦继红;;用鲎试剂检查甲氧苄啶注射液的细菌内毒素[J];药学服务与研究;2011年06期

9 张家庆;伏彭辉;毛献宝;范晓明;蒋如明;;公猪精液中细菌的分离鉴定及药敏试验[J];养猪;2009年06期

10 左学兰;周颖;李瑞芳;冯颖倩;何莉;刘明辉;;柚皮素诱导K562细胞凋亡与Caspase-3/Caspase-8酶活性及FAS/FASL蛋白表达的关系[J];中国实验血液学杂志;2008年02期

，

本文编号：828824