四川省动物源金黄色葡萄球菌耐药表型检测及主要耐药机制研究

发布时间：2017-09-11 07:10

  本文关键词：四川省动物源金黄色葡萄球菌耐药表型检测及主要耐药机制研究

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【摘要】：金黄色葡萄球菌是常见的人兽共患病原菌,对其进行耐药性研究具有重要意义。由于兽医临床抗菌药物的不规范使用,动物源金黄色葡萄球菌耐药性日益严重。对动物源金黄色葡萄球菌进行药物敏感性试验,主要耐药基因检测及分子流行病学研究,有助于了解耐药菌株的产生和传播趋势,为临床合理、规范用药提供理论依据。本文自2007年到2013年从不同动物源共分离得到236株金黄色葡萄球菌。对分离菌株进行对11种抗生素的药物敏感性检测后发现,除对苯唑西林表现出较高敏感性(敏感率大于80%)外,对其他药物呈不同水平耐药性,菌株对青霉素、氨苄西林、庆大霉素、卡那霉素、阿米卡星、红霉素、阿奇霉素、四环素、环丙沙星和磺胺异嗯唑的耐药率分别达92.8%、90.25%、47.88%、36.87%、39.83%、77.12%、58.47%、40.68%、26.28%、87.71%。本次菌株多重耐药现象严重,以6耐、9耐菌株为主。随着时间推移,菌株对不同抗菌药物耐药率呈上升趋势。不同动物源菌株耐药性比较可见,猪源菌株对红霉素、阿奇霉素耐药率显著高于禽源金黄色葡萄球菌(P0.05),而对其余9种药物的耐药率在不同动物源菌株间无显著性差异(P0.05)。金黄色葡萄球菌血浆凝固酶检测试验显示,236株金黄色葡萄球菌菌株中检出159株血浆凝固酶阳性菌株；且血浆凝固酶阳性菌株对青霉素G、苯唑西林、庆大霉素、卡那霉素、阿米卡星、环丙沙星耐药率显著高于血浆凝固酶阴性菌株(P0.05),多重耐药谱较血浆凝固酶阴性菌株更广泛。pvl、tst毒力基因的PCR扩增结果显示,236株金黄色葡萄球菌尚未检出相关毒力基因。本试验建立了blaZ-mecA二重PCR体系及aacA-aphD-ermA-mecA三重PCR体系,以及扩增blaZ、mecA、aacA-aphD、ermA、ermB、ermC等6种耐药基因的普通PCR体系。不同耐药基因的PCR扩增结果显示,介导β-内酰胺类耐药的基因blaZ、mecA检出率为63.98%和10.59%；介导大环内酯类、林可胺类、链阳霉素B类(MLSB)的耐药基因ermA、ermB、erm C检出率分别为11.44%、83.05%和87.29%；介导氨基糖苷类耐药基因aacA-aphD检出率43.64%。检出耐药基因组合以blaZ=ermB=ermC与blaZ=ermB+ermC=aacA-aphD为主。随着时间推移,菌株携带多耐药基因种类增加。对24株mecA基因介导的MRSA菌株进行SCCmec分型发现,2008年及2009年分离株主要为HA-MRSA菌株,占70.83%,2013年分离株主要为CA-MRSA,占20.83%；所有MRSA中,以SCCmec Ⅲ型为主,共有12株占50%。PFGE分子分型结果显示,24株MRSA菌株共分为14个聚类组,命名为A-H组;J组为主要类型,占25%(6/24)。以上结果说明,四川省不同动物源金黄色葡萄球菌对不同抗菌药物呈不同水平的耐药性,菌株对药物的耐药率随时间推移呈上升趋势,兽医临床应加强对金黄色葡萄球菌耐药性的监测；四川省不同动物源金黄色葡萄球菌浆凝固酶阳性率高达67.37%,且血浆凝固酶阳性菌比阴性菌株具有更严重的多重耐药性,说明致病性菌株长期、普遍存在于金黄色葡萄球菌群中,应加强对菌株血浆凝固酶以及耐药性的检测。本次检测的MRSA SCCmec分型较复杂,其中以SCCmec Ⅲ型为主,且属于Ⅲ型菌株携带的耐药基因最多。随分离时间的推移,菌株由HA-MRSA逐步向CA-MRSA转变,且携带的耐药基因更加丰富。MRSA菌株呈多克隆流行,兽医临床应长期持续加强MRSA流行规律的监测。
【关键词】：金黄色葡萄球菌 血浆凝固酶 耐药性 耐药基因 分子分型
【学位授予单位】：四川农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S852.6
【目录】：

• 摘要4-6
• ABSTRACT6-9
• 缩略词表9-12
• 概述12-20
• 1 金黄色葡萄球菌概述12
• 2 金黄色葡萄球菌的主要毒理基因及其致病性12-14
• 2.1 血浆凝固酶12-13
• 2.2 杀白细胞素(PVL)13
• 2.3 毒性休克综合症毒素I(TSST-I)13-14
• 3 兽医临床金黄色葡萄球菌主要耐药分子机制14-17
• 3.1 β-内酰胺类抗生素耐药机制14-15
• 3.2 大环内酯类、林可胺类及链阳霉素B(Macrolides,Lincosamides,Streptogramins B,MLS_B)耐药15-16
• 3.3 氨基糖苷类耐药16
• 3.4 其他耐药机制16-17
• 4 MRSA的分子分型研究17-18
• 4.1 SCCmec分型研究17-18
• 4.2 多位点序列分型(MLST)18
• 4.3 脉冲场凝胶电泳PFGE18
• 5 研究目的18-20
• 第一章 金黄色葡萄球菌的分离鉴定及耐药表型检测20-34
• 1 材料与方法20-25
• 1.1 材料20-22
• 1.2 方法22-25
• 2 结果25-31
• 2.1 金黄色葡萄球菌的分离、鉴定25-27
• 2.2 金黄色葡萄球菌对11种抗菌药物的耐药表型检测结果27-29
• 2.3 不同来源菌株对不同抗菌药物的耐药情况29-31
• 3 讨论31-33
• 3.1 金黄色葡萄球菌的分离鉴定31
• 3.2 金黄色葡萄球菌耐药性情况31-33
• 4 小结33-34
• 第二章 金黄色葡萄球菌的毒力因子检测34-43
• 1. 材料与方法34-37
• 1.1 材料34-35
• 1.2 方法35-37
• 2. 结果与分析37-40
• 2.1 金黄色葡萄球菌血浆凝固酶检测情况37-38
• 2.2 血浆凝固酶阳性菌与阴性菌耐药情况比较38-40
• 2.3 毒力基因PCR检测结果40
• 3. 讨论40-41
• 4. 小结41-43
• 第三章 金黄色葡萄球菌主要耐药基因检测43-57
• 1. 材料与方法43-46
• 1.1 材料43-44
• 1.2 方法44-46
• 2. 结果46-53
• 2.1 纸片扩散法检测结果46-47
• 2.2 MRSA与MSSA耐药性比较结果47-48
• 2.3 多重PCR体系的建立48-51
• 2.4 金黄色葡萄球菌多种药基因的检测51-53
• 3. 讨论53-56
• 4. 小结56-57
• 第四章 MRSA菌株的分子分型57-72
• 1. 材料与方法57-65
• 1.1 材料57-60
• 1.2 方法60-65
• 2. 结果65-69
• 2.1 SCCmec基因分型鉴定结果65-67
• 2.2 PFGE鉴定结果67-69
• 3. 讨论69-71
• 4. 小结71-72
• 参考文献72-79
• 致谢79-80
• 附录80-83
• 攻读硕士期间发表学术论文83

【参考文献】

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本文编号：829306