猪圆环病毒2d亚型衣壳蛋白在昆虫细胞中的表达

发布时间：2017-09-11 13:46

  本文关键词：猪圆环病毒2d亚型衣壳蛋白在昆虫细胞中的表达

  更多相关文章： 猪圆环病毒d亚型 衣壳蛋白 杆状病毒表达系统 基因分型

【摘要】：为了在昆虫细胞中表达猪圆环毒病2型(Porcine circovirus type 2,PCV2)衣壳蛋白,本研究设计合成引物从临床病料中扩增获得猪圆环病毒(Porcine circovirus,PCV)山东株衣壳蛋白基因缺失核定位区的序列,并进行序列分析。将该片段克隆到杆状病毒供体载体p Fast Bac-1上,然后转化大肠杆菌(Escherichia coli)DH10-Bac感受态细胞,获得重组穿梭杆粒,将该杆粒转染到sf9昆虫细胞中,观察重组杆状病毒致细胞病变效应,并采用PCR、间接免疫荧光实验、十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)和Western blot鉴定衣壳蛋白的表达情况。结果表明,扩增获得的猪圆环病毒山东株属于PCV2d亚型,与我国目前使用的商品化疫苗株(PCV2a及PCV2b亚型)在160~180 aa抗原位点有差异。成功构建了重组供体质粒p Fast Bac1-PCV2d-Cap和重组穿梭杆粒Bacmid-PCV2d-Cap,获得的重组杆状病毒在昆虫细胞中成功表达了约24 k D的PCV2d-Cap,该蛋白可以与猪圆环病毒阳性血清及His标签抗体发生反应,证明具有良好的反应原性。本研究是我国首次采用杆状病毒系统表达PCV2d亚型衣壳蛋白,为制备PCV2d亚单位疫苗以及酶联免疫吸附测定(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)试剂盒、防范PCV2d亚型流行提供了理论依据。
【作者单位】： 青岛农业大学山东省高校预防兽医学重点实验室;
【关键词】： 猪圆环病毒d亚型 衣壳蛋白 杆状病毒表达系统 基因分型
【基金】：国家科技基础性工作专项项目(No.2012FY111000) 山东省现代农业产业技术体系生猪产业创新团队(No.SDAIT-06-022-08) 山东省自主创新及成果转化专项(No.2014ZZCX07105)
【分类号】：S852.65
【正文快照】： 猪圆环病毒(Porcine circovirus,PCV)是目前发现的最小的一种动物病毒,属于圆环病毒科(Circoviri-dae)圆环病毒属(Circovirus),为无囊膜、单链负股DNA病毒(Allan et al.,2012)。该病毒有2个血清型,即PCV1和PCV2(Lv et al.,2014;Ssemadaali etal.,2015)。PCV2又可分为5个基因亚

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 商绍彬,周继勇,吴建祥,陈庆新,龚辉;重组表达猪圆环病毒2型衣壳蛋白的抗原特性分析[J];微生物学报;2005年03期

2 陈长春;周建强;潘琪;蔡丙严;徐婷婷;王海燕;曹军平;;猪圆环病毒2型衣壳蛋白的表达[J];安徽农业科学;2010年35期

3 刘伟;朱怡平;张戴婷;关敏慧;何飞龙;杨谦;郭霄峰;;猪细环病毒2型衣壳蛋白的原核表达及纯化[J];中国畜牧兽医;2014年05期

4 成大荣;朱善元;陈长春;金山;徐建生;;猪圆环病毒1型和2型衣壳蛋白的表达与鉴定[J];中国预防兽医学报;2008年10期

5 朱义鑫,张晓光,杨怡姝,刘畅,乔文涛,陈启民,耿运琪;牛免疫缺陷病毒基质蛋白和衣壳蛋白的可溶性表达[J];中国病毒学;2005年01期

6 朱善元;陈长春;成大荣;金山;李祥瑞;;猪圆环病毒衣壳蛋白单克隆抗体的制备[J];扬州大学学报(农业与生命科学版);2008年03期

7 张敏,白俊杰,劳海华,叶星,简清,罗建仁;鳜传染性脾肾坏死病毒主要衣壳蛋白基因的原核表达[J];中国病毒学;2004年02期

8 周斌;刘珂;陈溥言;;猪瘟病毒衣壳蛋白靶向核酸酶表达系统的建立及鉴定[J];病毒学报;2008年06期

9 Fiona L Tanzer;刘丹;;猪圆环病毒1型衣壳蛋白基因启动子增强人类免疫缺陷病毒1型质粒疫苗的抗原表达和免疫原性的研究[J];中国畜牧兽医;2012年01期

10 刘宁;时洪艳;陈建飞;冯力;张鑫;胡桂学;;猪瘟病毒衣壳蛋白的细胞核定位研究[J];中国预防兽医学报;2014年01期

中国重要会议论文全文数据库 前10条

1 张晓丹;吕茂民;吴健敏;章金刚;;猪内源性反转录病毒衣壳蛋白基因真核表达载体的构建与单克隆抗体制备[A];中国生物工程学会第四次会员代表大会暨学术讨论会论文摘要集[C];2005年

2 宋勤叶;杨汉春;郭鑫;陈艳红;查振林;;表达猪圆环病毒2型衣壳蛋白的重组质粒在小鼠体内诱导的免疫反应[A];第一届中国养猪生产和疾病控制技术大会——2005中国畜牧兽医学会学术年会论文集[C];2005年

3 李洋;金宁一;韩松;李霄;金苗苗;杨尧;;Ⅱ型猪圆环病毒长春株衣壳蛋白基因的克隆及原核表达[A];中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第三届猪病防控学术研讨会论文集[C];2008年

4 相琪旺;姜世金;邹金峰;孙亚妮;王鑫;高继明;谢之景;王玉;;鸭圆环病毒衣壳蛋白核定位信号的确定及部分功能[A];中国畜牧兽医学会禽病学分会第十六次学术研讨会论文集[C];2012年

5 周斌;刘珂;陈溥言;;猪瘟病毒衣壳蛋白靶向核酸酶表达系统的建立及鉴定[A];中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第三届猪病防控学术研讨会论文集[C];2008年

6 杨铭;何山杉;李介博;袁德凯;;HIV-1衣壳蛋白结构与功能及其作为新靶标的抑制剂的研究[A];2006年全国生化与生物技术药物学术年会论文集[C];2006年

7 王延树;向华;郑翠玲;严悌昆;宣华;;猫杯状病毒衣壳蛋白多表位抗原的原核表达[A];中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十二次学术研讨会论文集[C];2007年

8 罗军荣;斯日古楞;刘霄卉;周建华;马学恩;;JSRV衣壳蛋白单克隆抗体识别表位的筛选[A];中国畜牧兽医学会兽医病理学分会第十六次学术研讨会、中国病理生理学会动物病理生理专业委员会第十五次学术研讨会论文集[C];2009年

9 侯蔷;袁道莉;毛亚萍;孙佳增;王爽;李智丽;刘维全;;水貂肠炎病毒衣壳蛋白VP2的功能研究[A];全国动物生理生化第十二次学术交流会论文摘要汇编[C];2012年

10 赵玉然;薛长湖;;诺如病毒的原核表达与抗血清的制备[A];2007年中国水产学会学术年会暨水产微生态调控技术论坛论文摘要汇编[C];2007年

中国博士学位论文全文数据库 前7条

1 张磊;黑胸大蠊浓核病毒衣壳蛋白的表达与定位研究[D];武汉大学;2012年

2 尹双辉;猪圆环病毒2型衣壳蛋白病毒样颗粒的制备及其免疫原性的研究[D];中国农业科学院;2011年

3 宋勤叶;表达猪圆环病毒2型衣壳蛋白重组质粒的构建及免疫效应[D];中国农业大学;2005年

4 帅江冰;猪圆环病毒衣壳蛋白核定位信号对其复制的影响及突变体病毒的免疫原性研究[D];浙江大学;2008年

5 严维巍;兔出血症病毒中国株衣壳蛋白基因的表达及其免疫原性初探[D];扬州大学;2003年

6 孙健;人乳头瘤病毒衣壳蛋白特异性多肽与细胞受体的结合机制研究[D];吉林大学;2011年

7 金石;人乳头瘤病毒（HPV）衣壳蛋白L1的体外可控组装[D];吉林大学;2014年

中国硕士学位论文全文数据库 前10条

1 李扬帆;蓝舌病病毒1型衣壳蛋白在昆虫细胞中的表达及竞争ELISA检测方法的建立[D];中国农业科学院;2015年

2 李艳丽;嵌合口蹄疫病毒中和表位的猪圆环病毒衣壳蛋白表达与免疫原性研究[D];中国农业科学院;2013年

3 陈长春;猪圆环病毒衣壳蛋白的表达及其单克隆抗体的制备[D];扬州大学;2007年

4 朱金梅;兔出血症病毒复制子的构建及其衣壳蛋白基因遗传变异分析[D];西北农林科技大学;2007年

5 章萍萍;人类肠道病毒71型衣壳蛋白全基因成和原核表达分析[D];安徽医科大学;2012年

6 王亚楠;大菱鲆红体病虹彩病毒主要衣壳蛋白与宿主蛋白的相互作用研究[D];中国海洋大学;2008年

7 马静;小衣壳蛋白pⅨ对3型牛腺病毒包装作用的研究[D];西北农林科技大学;2014年

8 薛念波;伪狂犬病毒Ea株主要衣壳蛋白之间的相互作用研究[D];华中农业大学;2008年

9 牛银杰;Asia1型口蹄疫病毒衣壳蛋白进化踪迹分析[D];中国农业科学院;2014年

10 黄泽彬;猪肠道杯状病毒衣壳蛋白重组抗原的研制及应用[D];湖南农业大学;2008年

，

本文编号：831103