肉种鸡场孵化后期死亡鸡胚禽支原体感染调查

发布时间：2017-09-12 06:01

  本文关键词：肉种鸡场孵化后期死亡鸡胚禽支原体感染调查

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【摘要】：垂直传播是禽支原体病代代相传的主要原因,因此控制禽支原体感染的首要任务做好建立无病鸡群的工作。但支原体自身的变异特性、免疫逃逸功能决定了禽支原体病比急性、烈性传染病更加难于控制,通过疫苗免疫和药物治疗很难消灭支原体。在各种防控支原体措施中,免疫尤其活疫苗免疫依然是综合控制的核心和重点。为了解目前国内种鸡场禽支原体防控效果,本研究对某肉种鸡场孵化后期胚胎死亡进行禽支原体感染情况调查并进行敏感药物筛选,以期提出更完善的肉种鸡场支原体防控措施。支原体分离困难,其中主要在于分离样品的选择。对于死胚中禽支原体分离如何选择样品国内尚无详细无报道。为确定死胚禽支原体最佳分离部位,本研究人工感染鸡胚,鸡胚死亡后分别选择卵黄囊、绒毛尿囊膜、卵黄、口咽分泌物、肺进行MG分离培养,最终确定死胚最佳分离部位为卵黄囊。为了了解孵化后期死胚中禽支原体感染情况,本研究从山东某疑似禽支原体感染的种鸡场采集样品,采用分离培养和PCR同时检测死胚中禽支原体,以确定其禽支原体感染率,评价禽支原体防控效果,同时获得禽支原体临床分离株进行耐药性分析。分离培养获得3株MG,未分离到MS。根据MG 16s rDNA和MG MGc2基因保守区域,合成了两对特异性引物,分别对100份样品进行PCR检测,根据电泳及部分PCR产物测序结果,最终判定该养殖场MG的感染率为59%。本研究检测了12株MG临床分离株对14种抗菌药的敏感性。药物敏感试验结果显示,盐酸沃尼妙林、延胡索酸泰妙菌素、强力霉素敏感性最高,MIC平均值分别为0.028μg/m L、0.167μg/m L和0.29μg/m L,其次是盐酸大观霉素、水溶性氟苯尼考、酒石酸泰乐菌素、盐酸左氧氟沙星、盐酸恩诺沙星,MIC平均值在2.5～10μg/m L之间,而对盐酸林可霉素、水溶性阿奇霉素、乳酸诺氟沙星、硫酸丁胺卡那霉素、磷酸替米考星、酒石酸吉他霉素敏感性较低,MIC平均值在20～160μg/mL之间。
【关键词】：禽支原体 分离培养 鸡胚 感染 耐药性监测
【学位授予单位】：山东农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S858.31
【目录】：

• 摘要9-10
• Abstract10-12
• 前言12-23
• 1 病原学12-14
• 1.1 禽支原体种类12
• 1.2 形态和染色12-13
• 1.3 培养特性13
• 1.4 生化特性13
• 1.5 抵抗力13-14
• 2 致病机理14-16
• 2.1 MG致病机理14-15
• 2.2 MS致病机理15-16
• 3 临床症状与剖检变化16-17
• 3.1 MG临床症状与剖检变化16
• 3.2 MS临床症状与剖检变化16-17
• 3.2.1 临床症状16-17
• 3.2.2 剖检变化17
• 4 支原体的诊断17-19
• 4.1 病原体的分离和鉴定17
• 4.2 血清学方法17-18
• 4.3 分子生物学方法18-19
• 5 防制措施19-23
• 5.1 药物预防19-20
• 5.1.1 西药预防19-20
• 5.1.2 中药防治20
• 5.2 疫苗预防20-22
• 5.2.1 MG活苗20-21
• 5.2.2 MG灭活疫苗21-22
• 5.3 管理预防22-23
• 5.3.1 控制水平传播控制22
• 5.3.2 鸡群净化22
• 5.3.3 种蛋处理22-23
• 引言23-24
• 第一章 从死胚中分离禽支原体样品采集方法的研究24-33
• 1 材料24-27
• 1.1 菌株与鸡胚24
• 1.2 主要试剂24-25
• 1.3 禽支原体培养基配制25-27
• 1.4 主要仪器27
• 2 方法27-29
• 2.1 人工感染鸡胚27-28
• 2.1.1 菌株选择27
• 2.1.2 颜色变化单位（CCU）的测定及待检菌液的稀释27-28
• 2.1.3 鸡胚接种28
• 2.2 支原体分离培养28
• 2.2.1 样品处理28
• 2.2.2 分离培养28
• 2.3 PCR扩增及测序28-29
• 2.3.1 引物设计28
• 2.3.2 DNA模板的制备28-29
• 2.3.3 PCR反应29
• 3 结果29-32
• 3.1 人工感染鸡胚29-30
• 3.2 细菌分离30
• 3.3 支原体分离培养30-31
• 3.4 PCR扩增及测序31-32
• 4 讨论32-33
• 第二章 死胚中禽支原体分离鉴定及感染率调查33-42
• 1 材料33-37
• 1.1 样品采集与处理33-34
• 1.2 主要试剂34
• 1.3 支原体分离鉴定34-35
• 1.3.1 鸡胚及弱雏34
• 1.3.2 样品处理34
• 1.3.3 分离培养34
• 1.3.4 纯化34
• 1.3.5 细菌L型鉴定34
• 1.3.6 菌体形态观察34
• 1.3.7 菌落着色34
• 1.3.7 鸡红细胞吸附试验34
• 1.3.8 16sDNA鉴定及系统发育树构建34-35
• 1.4 PCR法检测死胚胚卵黄囊中支原体感染率35-37
• 1.4.1 DNA提取35
• 1.4.2 引物设计35-36
• 1.4.3 PCR扩增36-37
• 2 结果37-39
• 2.1 支原体的分离鉴定37-38
• 2.1.1 分离培养37
• 2.1.2 L形细菌检验37
• 2.1.3 菌落着色37
• 2.1.4 菌体形态观察37
• 2.1.5 鸡红细胞吸附试验37-38
• 2.1.6 16sDNA鉴定及系统发育树构建38
• 2.2 PCR法检测死胚及弱雏禽支原体感染率38-39
• 3 讨论39-42
• 第三章 鸡毒支原体临床分离株的耐药性检测42-48
• 1 材料与方法42-43
• 1.1 试验菌株42
• 1.2 抗菌药42
• 1.3 药物敏感性检测42-43
• 1.3.1 颜色变化单位（CCU）的测定及待检菌液的稀释42
• 1.3.2 最低抑菌浓度（MIC）的测定42-43
• 2 结果43-45
• 3 讨论45-48
• 参考文献48-55
• 致谢55

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