猪繁殖障碍性疫病常见病毒多重PCR诊断方法的建立及初步应用

发布时间：2017-09-14 08:45

  本文关键词：猪繁殖障碍性疫病常见病毒多重PCR诊断方法的建立及初步应用

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【摘要】：根据GenBank登录的猪细小病毒病(PPV)、猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪圆环病毒病2型(PCV2)、猪繁殖与呼吸综合征病毒欧洲分离株LV(PRRSLV)和美洲分离株VR(PRRSVR)等5种病毒基因序列设计合成5对特异性引物。通过优化反应条件,建立了同时检测5种病毒混合感染的多重PCR方法,对其特异性、敏感性、重复性进行检测;并将其应用于临床病料检验。结果显示:多重PCR方法中,当PPV、PRV、PCV2、PRRSVR和PRRSLV引物浓度为1.0、0.5、0.5、1.5、1.5μmol/L、退火温度为60℃时,扩增效果最佳,其扩增出特异性目的片段分别为142、331、547、705、1 367bp,最低检测量分别为155、45.2、17.2、14.2、43.6pg,在不同时间对相同样本重复检验6次,结果一致;对临床收集的125份疑似猪病料样品进行多重PCR技术和单一PCR技术进行对比检测,总符合率在97.9%以上,PPV、PRV、PCV2、PRRSLV和PRRSVR的阳性率分别为31.20%、36.8%、34.4%、1.6%和40.8%,混合感染率分别为16.8%、28.8%、23.2%、1.6%和30.4%。结果表明:本试验建立的多重PCR方法具有敏感性高、特异性强、稳定性好,可检测PPV、PRV、PCV2、PRRSVR和PRRSLV的混合感染。
【作者单位】： 辽宁医学院畜牧兽医学院;
【关键词】： 猪繁殖障碍性疾病 多重PCR 建立 应用
【基金】：辽宁省教育厅科研项目(L2014327)
【分类号】：S858.28
【正文快照】： Establishment and preliminary application of a mutiplex PCR method for detec-tion viruses induced reproductive failure of swineGUAN Nan,LU He,FEI Dong-liang,WANG Shu-quan*(Liaoning Medical University,College of*Corresponding author随着养猪业集约化和规模

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