蒙古马和纯血马肠道真菌多样性初步研究及分析

发布时间：2017-09-21 18:32

  本文关键词：蒙古马和纯血马肠道真菌多样性初步研究及分析

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【摘要】：近年来赛马和马术表演等已成为世界新兴产业,但马胃肠疾病的发生严重影响了马匹性能,而蒙古马生活在恶劣的蒙古高原上,本身具有卓越的优良特性,很少发生肠道疾病,这可能与肠道微生物的作用密不可分。为了了解马肠道真菌生物多样性,本研究以蒙古马和纯血马肠道真菌微生物为研究对象,运用粪便总DNA提取技术、PCR-DGGE结合克隆测序技术,对相同饲养条件下的蒙古马和纯血马、不同饲养条件下的蒙古马肠道真菌微生物进行了生物多样性的研究和分析,结果为：1试验采用经典试剂盒对粪便中真菌总DNA进行提取,总DNA在质量和浓度上均很好；PCR过程中采用巢式与降式两种方法结合的方式,并在PCR体系中加入BSA,增强了目的DNA的特异性。2 DGGE指纹图谱显示,每条泳道均含有丰富的条带数,初步证明蒙古马和纯血马肠道内均含有丰富的真菌微生物。利用Quantity One软件初步分析得到了DGGE模型分析图并对条带进行主成分分析,证明蒙古马和纯血马肠道真菌存在一定差异,但大部分是相同种属。UPGMA聚类图分析证明,种内相似性大于品种间相似性,纯血马种内相似性大于蒙古马种内相似性；不同饲养条件下的蒙古马相似性低于相同饲养条件下的。通过对微生物指数进行t检验分析,证明蒙古马和纯血马以及不同饲养条件下的蒙古马肠道真菌微生物在多样性、丰富度和均匀度指数上均无显著差异。3蒙古马和纯血马测序结果证明：菌种几乎分别属于子囊菌门、担子菌门和新丽鞭毛菌门,以子囊菌门含量最多。蒙古马共检测到39个真菌,比对后相似度97%以上的占60%,未知真菌占40%；纯血马共检测到31个真菌,相似度97%以上的占54.8%,未知真菌占45.2%；青草放牧蒙古马共检测到31个真菌,相似度97%以上的占42%,未知真菌占58%;证明马肠道真菌微生物部分是未知真菌。4蒙古马和纯血马共有菌属：胃梨囊霉属、盲肠菌属、牛粪盘菌、细齿粪盘菌、库德里阿兹威毕赤酵母、黄灰青霉菌和一些外源性真菌；蒙古马特有菌属为肠霉属、群生球根瘤胃真菌、小红酵母和一些外源性真菌；纯血马特有真菌为粪盘菌属和瘤胃真菌。青草放牧条件下特有真菌主要集中在外源性真菌；干草舍饲新检测到了锁掷孢酵母属、扩展青霉菌、瘤胃真菌。
【关键词】：蒙古马 纯血马 肠道真菌 多样性 PCR-DGGE
【学位授予单位】：内蒙古农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S821
【目录】：

• 摘要3-4
• Abstract4-10
• 缩略语表10-11
• 1 引言11-25
• 1.1 马的介绍11-12
• 1.1.1 蒙古马介绍11-12
• 1.1.2 蒙古马的保护12
• 1.1.3 纯血马介绍12
• 1.2 马业的发展12-14
• 1.2.1 中国马业的发展12-13
• 1.2.2 世界马业发展现状13
• 1.2.3 马业的重要性及问题13-14
• 1.3 肠道微生物介绍14-16
• 1.3.1 真菌的介绍14-15
• 1.3.2 马属动物肠道微生物的研究15-16
• 1.4 肠道真菌微生物研究方法16-23
• 1.4.1 研究微生物主要技术方法16-20
• 1.4.2 变性梯度凝胶电泳技术20-23
• 1.5 选题目的与意义23-24
• 1.6 技术路线24-25
• 2 试验材料与方法25-33
• 2.1 试验材料25-26
• 2.1.1 采样25
• 2.1.2 主要实验仪器与试剂25-26
• 2.2 试验方法26-33
• 2.2.1 样品总DNA的提取26-27
• 2.2.2 粪便中真菌PCR扩增27-29
• 2.2.3 变性梯度凝胶电泳29-30
• 2.2.4 切胶回收30-31
• 2.2.5 酶切鉴定31-33
• 3 试验结果与讨论33-62
• 3.1 蒙古马与纯血马肠道真菌多样性比较分析33-49
• 3.1.1 粪便真菌总DNA的提取33
• 3.1.2 真菌PCR扩增33-34
• 3.1.3 DGGE电泳34
• 3.1.4 DGGE电泳分析34-38
• 3.1.5 微生物多样性指数分析38-40
• 3.1.6 质粒的酶切鉴定40
• 3.1.7 序列测序与比对分析40-43
• 3.1.8 讨论43-49
• 3.2 不同饲养条件下蒙古马肠道真菌微生物多样性比较分析49-62
• 3.2.1 粪便总DNA的提取49
• 3.2.2 真菌PCR扩增49
• 3.2.3 DGGE电泳49-50
• 3.2.4 DGGE电泳分析50-54
• 3.2.5 微生物多样性指数分析54-55
• 3.2.6 质粒的酶切鉴定55-56
• 3.2.7 序列测序与比对分析56-60
• 3.2.8 讨论60-62
• 4 结论62-63
• 5 展望63-64
• 致谢64-65
• 参考文献65-75
• 作者简介75

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本文编号：896197