化脓隐秘杆菌转座子分布与耐药相关性及木犀草素对转座子tnpA影响的研究

发布时间：2017-09-22 15:23

  本文关键词：化脓隐秘杆菌转座子分布与耐药相关性及木犀草素对转座子tnpA影响的研究

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【摘要】：化脓隐秘杆菌是一种常见的、与动物化脓性感染有关的条件性致病菌,可引起羊、牛、猪等动物的黏膜、皮肤、关节和内脏器官的化脓性感染。化脓隐秘杆菌对抗菌药物的耐药性迅速发展,已成为人们关注的热点。细菌存在多种耐药机制,其中转座子、质粒等可移动遗传元件在细菌耐药性水平传递方面起着重要作用,已有关于中草药消减或抑制细菌中可移动遗传元件传播的报道。本研究开展化脓隐秘杆菌耐药与转座子的相关性及木犀草素对化脓隐秘杆菌转座子影响的探索工作,以揭示转座子在化脓隐秘杆菌耐药性获得中的作用,为木犀草素作为抗耐药菌新药的研发奠定理论基础。本研究利用PCR方法检测了34株化脓隐秘杆菌基因组DNA中IS26、tnp513、tnpA、 tnpU、tn1721、merA等转座子的携带情况,并分析化脓隐秘杆菌耐药性的获得与转座子的相关性。结果表明,化脓隐秘杆菌分离株携带tnpA、IS26和tnp513三种转座子,检出率分别为41.18%、61.76%和17.65%；未检测出转座子tnpU、tn1721和merA;随着化脓隐秘杆菌多药耐药数的增加,转座子tnpA的阳性率亦增加,说明化脓隐秘杆菌耐药性产生或增加可能与转座子tnpA的存在密切关系。转座子IS26和tnp513的携带情况与化脓隐秘杆菌的耐药谱无明显相关性。针对转座子tnpA阳性菌株,分别检测不同浓度木犀草素作用不同时间后,化脓隐秘杆菌对红霉素和泰乐菌素的敏感性的变化情况,并探索木犀草素使耐药菌株恢复相对敏感性的浓度和作用时间；利用荧光定量PCR方法,分析亚抑菌浓度木犀草素作用前后化脓隐秘杆菌抗菌活性、耐药菌株中转座子tnpA基因序列及其mRNA表达量的变化,探究木犀草素对转座子tnpA基因序列及mRNA表达量的影响。结果表明,木犀草素对14株携带转座子tnpA的化脓隐秘杆菌具有良好的体外抗菌活性。木犀草素与红霉素、泰乐菌素合用,对化脓隐秘杆菌耐药菌株具有协同作用；木犀草素(浓度为0.039 mg/mL)作用30 h和36 h后,可以使红霉素和泰乐菌素对化脓隐秘杆菌的MIC分别下降4-16和2-64倍,使耐药的化脓隐秘杆菌变得相对敏感；木犀草素作用后,化脓隐秘杆菌转座子tnpA碱基序列没有变化,但tnpA mRNA的表达量均下降；随着tnpA mRNA相对表达量的下降,菌株的MIC值亦下降,说明木犀草素可能通过抑制化脓隐秘杆菌转座子tnpA mRNA的表达而影响其耐药性。本研究从细菌耐药性获得的机制入手,研究并分析转座子与化脓隐秘杆菌获得性耐药的相关性,为研究该菌的耐药机制做了一定的补充说明；又探究了木犀草素对转座子tnpA影响的研究,可为木犀草素作为抗耐药菌新药的研发提供新的思路。
【关键词】：化脓隐秘杆菌 转座子 木犀草素 耐药性 耐药机制
【学位授予单位】：沈阳农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S852.61
【目录】：

• 中文摘要11-12
• 英文摘要12-13
• 前言13-22
• 1.1 化脓隐秘杆菌的耐药现状13-14
• 1.1.1 化脓隐秘杆菌对抗菌药物的耐药现状13-14
• 1.1.2 化脓隐秘杆菌耐药性获得研究现状14
• 1.2 转座子与细菌耐药相关性研究进展14-19
• 1.2.1 转座子在细菌耐药性获得中的作用15
• 1.2.2 转座子在细菌中的分布情况15-19
• 1.3 中草药对细菌耐药性的影响19-21
• 1.3.1 可移动遗传元件与细菌耐药性的关系19-20
• 1.3.2 中草药对可移动遗传元件作用的影响20
• 1.3.3 中草药联合抗菌药物对耐药细菌的作用20-21
• 1.4 本研究的目的与意义21-22
• 试验一 化脓隐秘杆菌耐药性与转座子的相关性研究22-39
• 1.1 材料22-24
• 1.1.1 菌株22
• 1.1.2 酶和试剂22-23
• 1.1.3 主要设备及仪器23-24
• 1.1.4 培养基的制备24
• 1.1.5 主要试剂的配制24
• 1.2 方法24-28
• 1.2.1 转座子的检测24-28
• 1.2.2 转座子基因与耐药相关性分析28
• 1.3 结果与分析28-36
• 1.3.1 化脓隐秘杆菌基因组DNA的提取结果28-29
• 1.3.2 化脓隐秘杆菌转座子扩增结果29-30
• 1.3.3 化脓隐秘杆菌转座子PCR回收产物电泳结果30-32
• 1.3.4 化脓隐秘杆菌转座子阳性质粒PCR鉴定结果32
• 1.3.5 化脓隐秘杆菌转座子阳性质粒测序结果32
• 1.3.6 化脓隐秘杆菌转座子携带情况与耐药表型之间关系的分析32-36
• 1.4 讨论36-38
• 1.5 小结38-39
• 试验二 木犀草素对化脓隐秘杆菌转座子tnpA影响的研究39-53
• 2.1 材料39-40
• 2.1.1 菌株39
• 2.1.2 抗菌药物39
• 2.1.3 主要试剂39
• 2.1.4 主要仪器设备39-40
• 2.1.5 主要耗材40
• 2.2 方法40-46
• 2.2.1 培养基的配制40
• 2.2.2 细菌的复苏40
• 2.2.3 药物敏感性试验40-42
• 2.2.4 木犀草素对耐药性化脓隐秘杆菌转座子基因mRNA表达的影响42-46
• 2.3 结果与分析46-51
• 2.3.1 tnpA阳性化脓隐秘杆菌对红霉素、泰乐菌素、木犀草素的敏感性测定结果46-47
• 2.3.2 木犀草素与红霉素、泰乐菌素联合对tnpA阳性化脓隐秘杆菌药敏分析结果47-48
• 2.3.3 亚抑菌浓度木犀草素对化脓隐秘杆菌耐药菌株的敏感性试验结果48
• 2.3.4 木犀草素对耐药菌株中tnpA碱基序列的影响48-49
• 2.3.5 化脓隐秘杆菌转座子tnpA基因表达水平的荧光定量检测与分析49-51
• 2.4 讨论51-52
• 2.5 小结52-53
• 结论53-54
• 参考文献54-59
• 附录59-60
• 致谢60-61
• 攻读硕士学位期间发表文章61-62

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本文编号：901572