神经生长因子NGF在绿壳蛋鸡卵泡和输卵管中的表达及对卵泡发育的调控

发布时间：2017-09-24 13:06

  本文关键词：神经生长因子NGF在绿壳蛋鸡卵泡和输卵管中的表达及对卵泡发育的调控

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【摘要】：鸟类的排卵过程为卵巢发育成熟并产生成熟的卵泡,卵泡脱离卵巢通过输卵管的各个部分形成完整的蛋,并最终排出。而在这个过程中卵巢和输卵管受到诸多的生长因子和激素的调控。通过选育培养出的蛋鸡在进入高产期后几乎每天产蛋,其原因在于蛋鸡卵泡在生殖阶段可持续发育、并排卵和受精,卵巢排卵后亦不形成黄体,生殖周期极短,是作为生殖系统研究的理想试验动物。本试验以中国地方特色蛋鸡品种绿壳蛋鸡为试验材料,测定不同产蛋时期的等级前卵泡、优势等级卵泡和输卵管中的神经生长因子NGF及其受体的mRNA表达量,并对产蛋期和就巢期的组织进行NGF及其受体的表达对比,同时通过体外培养的方式对绿壳蛋鸡的F1卵泡颗粒细胞培养并添加NGF蛋白,测定各个受体的mRNA表达量和性腺激素的分泌量。结果如下：通过对绿壳蛋鸡不同产蛋阶段(19W、33W、50W、64W)的生殖组织进行采样并提取mRNA,并进行荧光定量对其卵泡和输卵管的NGF及其受体的mRNA表达量测定。结果表明：NGF在绿壳蛋鸡各个产蛋时期中的卵泡和输卵管中都有表达；在等级前卵泡中,除了产蛋末期外,其他时期的小白卵泡SWF的NGF和其高亲和力受体酪氨酸激酶A (TrkA)的mRNA表达量要显著高于其他等级前卵泡(P0.05),且随着等级前卵泡的发育,NGF的表达量呈现下降的趋势,而在整个产蛋时期中,NGF在产蛋高峰期表达量最高；在等级卵泡中,NGF及其受体在F4卵泡中表达量在各时期都较高,且在产蛋前期和高峰期,F1-F4的mRNA表达量都高于F5的mRNA表达量,而在整个产蛋周期中,NGF的表达量在产蛋高峰期处于峰值；每个时期的输卵管各部位都有NGF的表达,且表达量随着绿壳蛋鸡产蛋周期的变化而变化,在产蛋后期NGF及其高亲和力受体表达量最高。以上结果说明,NGF的表达量与蛋鸡的生殖状况和产蛋性能相关,推测NGF可能参与了调控卵巢和输卵管生长发育并有助于蛋鸡产蛋。利用荧光定量测定方法对绿壳蛋鸡产蛋期和就巢期各组织的NGF及其受体的表达进行研究。结果表明：产蛋期的卵巢大于就巢期卵巢,且具有小黄卵泡SYF和F1-F6卵泡,而就巢期卵巢处于萎缩形态,没有优势卵泡；在产蛋期的卵巢基质中,NGF及其受体显著高于就巢期(P0.05)；在等级前卵泡中,SWF和LWF中的NGF及其高亲和力受体在产蛋期的mRNA的表达量显著高于就巢期(P0.05)。以上结果说明NGF及其受体在卵巢组织中的表达与禽类产蛋周期有影响,并可能参与了禽类产蛋时期与就巢时期的调控,NGF的表达有助于激活非发情期卵巢并改变卵巢形态,促使等级前卵泡发育成为等级优势卵泡。通过对F1卵泡颗粒细胞离体培养,添加NGF蛋白并进行受体基因的荧光定量及激素的Elisa检查,探究NGF蛋白在蛋鸡卵泡发育过程中的作用。结果表明：在添加不同浓度NGF蛋白处理后,颗粒细胞中的p75受体的表达量显著升高(P0.05),且随着NGF蛋白的浓度升高而升高；处理不同浓度的NGF蛋白后,颗粒细胞中的FSHR和LHR也显著升高(P0.05),且存在正相关关系；通过Elisa检查发现,添加NGF蛋白处理后的颗粒细胞中雌激素的分泌显著升高(P＜0.05),而孕激素则相反;在依次添加NGF和FSH处理后发现,雌激素的分泌在单独添加NGF和FSH时都将显著升高(P0.05),而且同时添加有叠加效果,而孕激素的分泌则相反。以上结果表明,NGF在禽类卵泡中能促进其LHR和FSHR的表达,通过加强细胞对激素的敏感性来调控卵泡的发育和排卵,并且影响动物的生理周期。综上所述,NGF及其受体能促进禽类早期卵巢和输卵管的生长和发育,并在卵巢和输卵管成熟后,促进卵巢卵泡的发育以及排卵,同时在也影响鸡的生殖周期。
【关键词】：绿壳蛋鸡 神经生长因子 卵泡 输卵管 激素 激素受体
【学位授予单位】：四川农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S831
【目录】：

• 摘要5-7
• Abstract7-10
• 缩写对照表10-13
• 1 文献综述13-26
• 1.1 NTs家族及其受体14-17
• 1.1.1 NTs家族成员14-15
• 1.1.2 NTs家族受体15-16
• 1.1.3 NTs家族与其受体的结合方式16-17
• 1.2 神经生长因子及其受体17-21
• 1.2.1 神经生长因子结构17-18
• 1.2.2 神经生长因子受体结构18-19
• 1.2.3 神经生长因子的作用机制19-21
• 1.3 神经生长因子及其受体在雌性生殖系统中的作用21-23
• 1.3.1 卵巢21-23
• 1.3.2 输卵管23
• 1.4 禽类生殖系统的发育23-26
• 1.4.1 禽类的卵泡发育23-24
• 1.4.2 禽类输卵管发育24
• 1.4.3 性腺激素24-26
• 1.5 本研究的目的意义26
• 2 材料与方法26-33
• 2.1 试验材料26-29
• 2.1.1 试验动物选择26-27
• 2.1.2 主要试剂及试剂盒27
• 2.1.3 主要试剂配制27-28
• 2.1.4 主要仪器设备28-29
• 2.2 试验方法29-33
• 2.2.1 样品采集29
• 2.2.2 鸡卵巢颗粒细胞培养29-30
• 2.2.3 颗粒细胞NGF蛋白处理30
• 2.2.4 颗粒细胞NGF蛋白及FSH处理30
• 2.2.5 总RNA提取30-31
• 2.2.6 总RNA质量和浓度的检测31
• 2.2.7 逆转录31-32
• 2.2.8 实时荧光定量(参照宝生物说明书)32
• 2.2.9 Elisa检测(参照Elisa说明书)32-33
• 2.3 数据分析33
• 3 结果与分析33-43
• 3.1 不同产蛋阶段绿壳蛋鸡NGF及其受体mRNA组织表达量33-37
• 3.1.1 等级前卵泡NGF及其受体的表达33-34
• 3.1.2 等级卵泡NGF及其受体的表达34-35
• 3.1.3 输卵管NGF及其受体的表达35-36
• 3.1.4 不同阶段NGF及其受体的表达趋势36-37
• 3.2 绿壳蛋鸡产蛋期和就巢期NGF及其受体的组织表达差异37-40
• 3.3 NGF对颗粒细胞的影响40-43
• 3.3.1 NGF对颗粒细胞TrkA和p75受体基因表达影响40
• 3.3.2 NGF对颗粒细胞激素受体表达影响40-41
• 3.3.3 NGF对颗粒细胞雌激素和孕激素分泌影响41-42
• 3.3.4 NGF和FSH对颗粒细胞雌激素和孕激素分泌影响42-43
• 4 讨论43-48
• 4.1 NGF及其受体在卵巢中的表达43-44
• 4.2 NGF及其受体在输卵管中的表达44-45
• 4.3 NGF对产蛋周期的调节45-46
• 4.4 NGF对颗粒细胞受体基因表达影响46-47
• 4.5 NGF对颗粒细胞雌激素和孕激素分泌影响47-48
• 5 结论48-49
• 参考文献49-56
• 致谢56-57
• 攻读硕士研究生期间发表的论文和专利57

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本文编号：911555