耐药性fosA3基因在猪源大肠杆菌中流行特点及传播机制研究

发布时间：2017-09-28 19:36

  本文关键词：耐药性fosA3基因在猪源大肠杆菌中流行特点及传播机制研究

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【摘要】：大肠杆菌是构成机体肠道正常菌群的组成部分,曾被认为是非致病菌且广泛分布于自然界中。近几年,因感染大肠杆菌而引起机体的腹泻、败血症及乳房炎等疾病频繁发生,严重制约着畜牧养殖业的发展。大肠杆菌容易对多种抗生素产生耐药性,而且能够通过质粒携带相关耐药基因的方式在不同菌株之间流行、传播,给临床抗感染治疗带来了严峻挑战。磷霉素是人医临床的专用抗菌药物,包括我国在内的世界多数国家禁止将其应用于兽医临床。然而,近几年我国动物源细菌出现了对磷霉素的耐药性,而且耐药率呈现逐年上升的趋势。目前的研究证实,fosA3基因是导致磷霉素耐药的主要机制,但对于fosA3基因在我国动物源大肠杆菌中的流行特点和传播机制目前尚不清楚。因此,开展fosA3基因在大肠杆菌中的流行情况及传播机制的研究已迫不及待。本研究对广东佛山各猪场采集的样本进行了大肠杆菌fosA3基因阳性菌株的分离、筛选和鉴定,共得到54株携带fosA3基因的大肠杆菌;应用脉冲场凝胶电泳方法分析菌株的亲缘性,最终获得34株不同克隆谱型的菌株,该结果与MLST分型方法一致。提取34株野生菌质粒并扩增fosA3基因,初步确定fosA3基因位于质粒上。为进一步分析fosA3基因传播机制,应用体外膜接合转移和Southern杂交试验对fosA3基因进行定位。结果显示,携带该基因的质粒能够通过菌种间的接触而进行水平转移,并且大部分携带该基因的质粒大小为~97kb。测序结果显示,携带fosA3基因的质粒多数为IncFII型接合转移质粒,由其侧翼的两个插入序列IS26携带其形成复合转座子进行转移。本研究选取9种药物测试野生菌株及接合子的药物敏感性及检测相关耐药基因,结果显示:34株大肠杆菌野生菌株均耐受6种以上抗生素,其中对头孢噻肟、四环素、多西环素、氯霉素和磷霉素的耐药率均表现为100%;对庆大霉素、氟苯尼考、环丙沙星和阿米卡星的耐药率均在70%以上;34株接合子除对环丙沙星表现为敏感外,对磷霉素、头孢噻肟、庆大霉素、四环素、阿米卡星、氯霉素、氟苯尼考和多西环素均表现出不同程度抗性;本研究在进行氯霉素类药物相关耐药基因扩增过程中,发现了对氟苯尼考耐药的cfr和floR基因;检测介导β内酰胺类抗生素相关耐药基因,主要为blaCTX-M-1基因、blaCTX-M-9和blaTEM基因;检测介导氨基糖苷类抗生素相关耐药基因主要为rmtA和rmtB基因;检测介导四环素类抗生素相关耐药基因,接合子仅检测到tetR基因。本研究初步探明了fosA3基因在猪源大肠杆菌中的传播机制,为临床指导合理用药及控制其快速传播提供理论依据
【关键词】：大肠杆菌 fosA3 Southern杂交 cfr 传播机制
【学位授予单位】：吉林农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S852.61
【目录】：

• 摘要4-5
• Abstract5-8
• 前言8-9
• 1.1 研究目的及意义8
• 1.2 研究的主要内容8-9
• 第一篇 文献综述9-15
• 第一章 大肠杆菌研究进展9-12
• 1.1 大肠杆菌概述9-10
• 1.2 大肠杆菌的耐药性及研究状况10-12
• 第二章 磷霉素耐药性研究现状12-15
• 2.1 磷霉素及其衍生物研究进展12-13
• 2.2 磷霉素及其衍生物的耐药机制13
• 2.3 fosA3基因的研究进展13-15
• 第二篇 研究内容15-61
• 第一章 猪源磷霉素耐药大肠杆菌的分离、鉴定及分子分型15-32
• 1.1 前言15
• 1.2 材料15-16
• 1.3 方法16-26
• 1.4 结果与分析26-29
• 1.5 讨论29-31
• 1.6 小结31-32
• 第二章 fosA3基因阳性大肠杆菌耐药性与基因定位研究32-60
• 2.1 前言32
• 2.2 材料与方法32-47
• 2.3 结果47-57
• 2.4 讨论57-59
• 2.5 小结59-60
• 第三章 结论60-61
• 参考文献61-69
• 作者简介69-70
• 致谢70-71

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本文编号：937727