LH诱导山羊卵泡膜细胞Akt磷酸化及对雄激素生成的影响

发布时间：2017-10-04 13:15

  本文关键词：LH诱导山羊卵泡膜细胞Akt磷酸化及对雄激素生成的影响

  更多相关文章： 卵泡膜细胞 LH PI3K/Akt信号通路 雄激素 山羊

【摘要】：卵泡膜细胞的一个重要功能是合成雄激素,而雄激素再通过颗粒细胞合成雌激素。卵泡膜细胞通过为颗粒细胞提供雄激素的方式在调控卵巢类固醇激素生成方面发挥重要的作用。卵巢功能的正常运转有赖于卵泡膜细胞生成类固醇激素活动的精确调节,而这种调节对于卵泡发育至关重要。卵泡膜细胞雄激素的生成主要由垂体释放的LH调控,垂体产生的LH随血液转运至卵泡膜细胞而发挥调控作用。已证实PI3K/Akt信号通路在多种细胞生命活动过程中发挥重要的作用,例如细胞的新陈代谢、细胞存活、炎症的发生、细胞生长、细胞增殖、转录和蛋白质合成等。研究LH在诱导卵泡膜细胞雄激素生成过程中细胞内相关信号转导的作用,对揭示卵巢生理功能及由于卵泡膜细胞生成类固醇过度引起的卵巢机能异常有重要意义。本研究利用体外培养的山羊卵泡膜细胞,研究了LH对PI3K/Akt信号通路的作用及对雄激素的生成的影响。主要研究结果如下:(1)通过机械分离结合胶原酶消化法和差速贴壁法,分离、纯化获得卵泡膜细胞。体外培养观察,卵泡膜细胞呈成纤维样,贴壁生长。传代至8代后,开始发生老化,生长变慢。细胞免疫荧光观察计数,分离得到的卵泡膜细胞波形蛋白染色呈阳性,阳性率为98.56±0.53%,角蛋白染色呈阴性,说明所获得的卵泡膜细胞可用于后续试验。(2)将卵泡膜细胞与LH共孵育,通过蛋白免疫印迹法分别检测细胞内总Akt及其磷酸化水平,发现卵泡膜细胞的Akt磷酸化水平在LH处理后12h达到峰值。而卵泡膜细胞与LH和PI3K抑制剂共同孵育后,发现PI3K抑制剂能抑制LH诱导的Akt磷酸化。表明LH可以激活卵泡膜细胞的Akt信号通路。(3)通过qRT-PCR检测结果表明LH诱导山羊卵泡膜细胞CYP11A1和CYP17A1基因表达显著升高(P0.05);添加PI3K的抑制剂LY294002后,显著降低LH诱导的CYP11A1、CYP17A1和StAR基因的表达(P0.05),但对LH诱导HSD3B1基因表达差异不显著(P0.05);添加PI3K抑制剂wormannin后显著降低LH诱导的CYP17A1和CYP11A1基因的表达(P0.05),而对LH诱导的StAR和HSD3B1基因表达影响差异不显著(P0.05);LH显著促进LHR基因的表达,添加LY294002后显著降低LHR基因的表达(P0.05),而wormannin抑制作用不显著(P0.05);LH显著提高卵泡膜雄激素的分泌(P0.05),而添加wormannin和LY294002后显著降低LH诱导的雄激素分泌(P0.05)。表明PI3K/Akt信号通路参与卵泡膜细胞分泌雄激素的过程。综上所述,本试验分离纯化了山羊卵泡膜细胞,利用体外培养的方式研究了LH通过PI3K/Akt信号通路介导卵泡膜细胞雄激素的生成过程。为进一步研究卵泡膜细胞雄激素生成的细胞内机制以及卵泡膜细胞对卵泡发育的作用奠定基础。
【关键词】：卵泡膜细胞 LH PI3K/Akt信号通路 雄激素 山羊
【学位授予单位】：西北农林科技大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S827
【目录】：

• 摘要6-8
• ABSTRACT8-12
• 第一章 文献综述12-24
• 1.1 卵巢卵泡膜细胞及其功能的研究进展12-19
• 1.1.1 什么是卵泡膜细胞12-13
• 1.1.2 卵泡膜细胞的来源与结构13
• 1.1.3 卵泡膜细胞的功能13-15
• 1.1.4 卵泡膜细胞的寿命15
• 1.1.5 影响卵泡膜细胞分化的主要因子15-19
• 1.2 PI3K/Akt信号通路的研究进展19-23
• 1.2.1 PI3K19-20
• 1.2.2 PI3K的激活机制20-21
• 1.2.3 PKB/Akt21
• 1.2.4 Akt的激活机制21-22
• 1.2.5 Akt调节细胞的生物过程22-23
• 1.2.6 PI3K/Akt信号通路抑制剂23
• 1.3 本研究的目的意义23-24
• 第二章 山羊卵泡膜细胞的分离培养与鉴定24-29
• 2.1 材料与试剂24
• 2.1.1 材料24
• 2.1.2 主要仪器与设备24
• 2.1.3 主要试剂及配制方法24
• 2.2 试验方法24-26
• 2.2.1 卵泡膜细胞的分离纯化24-25
• 2.2.2 卵泡膜细胞的培养25
• 2.2.3 卵泡膜细胞的鉴定25-26
• 2.3 试验结果26-27
• 2.3.1 卵泡膜细胞的形态特征26
• 2.3.2 卵泡膜细胞鉴定结果26-27
• 2.4 讨论27-28
• 2.5 本章小结28-29
• 第三章 LH对卵泡膜细胞PI3K/Akt信号通路的作用29-35
• 3.1 材料和试剂29-30
• 3.1.1 材料29
• 3.1.2 主要试剂及配制方法29-30
• 3.1.3 主要仪器和设备30
• 3.2 试验方法30-31
• 3.2.1 LH处理卵泡膜细胞30
• 3.2.2 PI3K抑制剂处理卵泡膜细胞30
• 3.2.3 细胞总蛋白的提取及蛋白免疫印迹（Western blot analysis）30-31
• 3.3 试验结果31-33
• 3.3.1 LH处理后蛋白免疫印迹结果31-32
• 3.3.2 PI3K抑制剂处理卵泡膜细胞的蛋白印迹结果32-33
• 3.4 讨论33-34
• 3.5 小结34-35
• 第四章 PI3K抑制剂对卵泡膜细胞雄激素生成的影响35-42
• 4.1 材料和试剂35-36
• 4.1.1 材料35
• 4.1.2 主要试剂及配制方法35-36
• 4.1.3 主要仪器和设备36
• 4.2 试验方法36-38
• 4.2.1 LH和抑制剂处理卵泡膜细胞36
• 4.2.2 cDNA的制备和实时定量PCR反应36-37
• 4.2.3 雄激素的测定37
• 4.2.4 统计分析37-38
• 4.3 试验结果38-40
• 4.3.1 类固醇合成酶基因的表达38-39
• 4.3.2 LH反应性39
• 4.3.3 雄激素的浓度39-40
• 4.4 讨论40-41
• 4.5 小结41-42
• 全文结论42-43
• 创新点和后续研究的主要课题43-44
• 创新点43
• 后续研究的主要问题43-44
• 参考文献44-52
• 缩略 词52-53
• 致谢53-54
• 作者简介54

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前3条

1 李莹辉,汪琳仙,杨传任;催乳素对促性腺激素诱导的鸡卵泡膜细胞类固醇激素合成的抑制作用[J];中国兽医学报;1996年06期

2 赵畅;汪琳仙;;鸡促性腺激素释放激素对卵泡膜分泌雌二醇的影响[J];北京农业大学学报;1993年02期

3 ;[J];;年期

中国重要会议论文全文数据库 前4条

1 田金灵;高建明;;卵泡膜细胞分化及其功能研究进展[A];中国畜牧兽医学会动物繁殖学分会第十六届学术研讨会论文集[C];2012年

2 熊曙康;张丹;李威;吴效科;;卵泡膜细胞胰岛素抵抗的生物学效应以及隐丹参酮的调控[A];第十次全国中医妇科学术大会论文集[C];2010年

3 曾海涛;梁晓燕;姚书忠;沈宏伟;焦泽旭;;高胰岛素和高LH/FSH比值对PCOS卵泡颗粒细胞和卵泡膜细胞甾体激素分泌的影响[A];第八次全国妇产科学学术会议论文汇编[C];2004年

4 张二红;染晓燕;曾海涛;徐艳文;;PCOS中B超下内膜声像与组织学及性激素关系探讨[A];第八次全国妇产科学学术会议论文汇编[C];2004年

中国硕士学位论文全文数据库 前4条

1 邹鹏达;LH诱导山羊卵泡膜细胞Akt磷酸化及对雄激素生成的影响[D];西北农林科技大学;2016年

2 薛凯;NR4A1基因调控卵泡膜细胞激素生成的研究[D];南京医科大学;2009年

3 田勇;氧化应激通过P38sapk途径上调P16基因表达引起卵泡膜间质细胞的衰老[D];华中科技大学;2013年

4 杨春红;鸡CCT6A基因的功能及启动子区的多态性研究[D];山东农业大学;2014年

，

本文编号：970870