硫化氢对人正常子宫内膜上皮细胞前列腺素E2合成酶的调节

发布时间：2018-01-25 08:45

本文关键词： 人正常子宫内膜上皮细胞硫化氢前列腺素 E2合成酶 siRNA　出处：《第二军医大学》2014年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：临床上将在围着床期时发生的早期妊娠丢失称为生化妊娠，这种现象在人类中相对普遍。尽管体外辅助生殖技术得到迅速发展，许多潜在不孕原因得到克服，但其受孕率仍较低，其主要原因是胚胎植入失败。而子宫内膜容受性是影响胚胎植入的关键因素之一，子宫内膜容受过程实际就是一个促炎性反应及子宫内膜血管的通透性增加的过程。在这过程中受到雌孕激素以及各种生长因子、细胞因子、粘附分子等组成一个精细的网络系统共同调控，在这系统调控下子宫内膜才能达到对胚泡最大容受性，目前已有研究证实前列腺素是提高子宫内膜血管通透性的重要介质，并有研究发现如体内缺乏一些前列腺素合成酶可导致着床及子宫内膜蜕膜化失败。另外有文献报道在一些炎性疾病中细胞所产生的内源性H2S可上调环氧化酶-2（COX2）的表达。而H2S作为一种新型信号气体分子，研究者发现其可参与体内许多系统的生理、病理机制,比如：H2S可通过激活血管平滑肌细胞钾离子通道（KATP）使细胞内膜超极化，达到扩张血管平滑肌作用，从而控制血压。而在生殖系统方面，2009年Patel等人首次在大鼠和人类的子宫肌、胎盘、胎膜中发现有胱硫醚 β 合酶（CBS）和胱硫醚 γ 裂解酶（CSE）的表达，可产生内源性H2S，随后研究发现H2S在妊娠期间维持子宫静止状态起到一定作用。但目前人子宫内膜是否同样有CBS和CSE的表达，且具有产生内源性H2S的能力，参与其生理、病理机制的调节，这方面尚无报道。为此，本课题以原代培养的人正常子宫内膜上皮细胞为研究对象，首先确认原代培养的人正常子宫内膜上皮细胞中含有CBS、CSE的表达，提示人正常子宫内膜上皮细胞可能具有产生内源性H2S的能力。随后加入外源性的雌孕激素对细胞处理，明确人正常子宫内膜上皮细胞中CBS、CSE的表达受性激素调节。另外，通过对原代培养的人正常子宫内膜上皮细胞中加入H2S供体-NaHS、前体L-cys，明确了H2S对COX2、mPGES-1表达有调节作用。并利用siRNA干扰技术，进一步明确在人正常子宫内膜上皮细胞中内源性H2S生成的关键酶。主要实验结果如下： 1、原代培养人正常子宫内膜上皮细胞中CBS和CSE的表达情况为说明原代培养的人正常子宫内膜上皮细胞是否有内源性H2S的能力，我们首先利用免疫组化方法证实在人正常子宫内膜中含有CBS、CSE的表达，而后进一步培养原代人正常子宫内膜上皮细胞，利用Western blot方法显示细胞中同样有CBS、CSE的表达，进一步证实了人正常子宫内膜上皮细胞可能具有产生内源性H2S的能力；同时为了解人正常子宫内膜上皮细胞中内源性H2S的产生是否受性激素影响，我们加入外源性雌二醇及孕激素，通过Western blot方法检测CBS和CSE的表达，提示在雌二醇及孕激素均上调细胞中CBS和CSE的蛋白表达，且雌孕激素联合给药时更为显著。根据以上结果作出以下推论：在人正常子宫内膜上皮细胞中可能有内源性H2S产生，且可能在分泌期时较高。 2、H2S调节原代人正常子宫内膜上皮细胞前列腺素E2合成酶的表达为明确H2S如何调控原代培养的人正常子宫内膜上皮细胞中COX2、mPGES-1的表达。首先，加入不同浓度的H2S的供体NaHS和前体L-半胱氨酸，然后通过Western blot方法检测前列腺素E2合成酶-COX2和mPGES-1的蛋白表达情况，结果提示：H2S对原代培养的人正常子宫内膜上皮细胞中前列腺素E2合成酶-COX2和mPGES-1的蛋白表达起上调作用，且在一定范围内呈剂量依耐性；接下来，为进一步确定CBS、CSE在L-cys在调节细胞中COX2、mPGES-1表达的作用，我们在原代培养的人正常子宫内膜上皮细胞中加入CBS siRNA和CSE siRNA转染细胞，转染24小时后，加入L-cys，Western blot方法检测前列腺素E2合成酶-COX2和mPGES-1的蛋白表达情况，发现人正常子宫内膜上皮细胞中COX2、mPGES-1的蛋白表达均下降。通过以上实验结果推论：H2S在人正常子宫内膜上皮细胞中通过上调前列腺素E2合成酶-COX2和mPGES-1的蛋白表达来实现对PGE2生成的上调作用。另外，为证实H2S在人正常子宫内膜上皮细胞中通过KATP通道来调节COX2、mPGES-1的表达，我们加入KATP拮抗剂-格列本脲，，实验结果提示：格列本脲可逆转H2S对细胞中COX2、mPGES-1表达的上调。结论：人正常子宫内膜上皮细胞受CBS和CSE共同作用下产生内源性H2S，且可能受体内雌二醇及孕激素调控产生变化。H2S可通过原代人正常子宫内膜上皮细胞KATP通道来上调COX2、mPGES-1的表达，从而增加人子宫内膜上皮细胞局部的PGE2浓度，进而参与到子宫内膜容受性和基质蜕膜化调节。
[Abstract]:......
【学位授予单位】：第二军医大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R714.8

【共引文献】