维生素B12对宫内发育迟缓大鼠脑损伤的干预研究

发布时间：2018-02-09 03:53

  本文关键词： 宫内发育迟缓 维生素B12 脑损伤 髓鞘碱性蛋白　出处：《苏州大学》2014年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：目的：通过孕鼠孕期低蛋白（6%蛋白）饮食法制造宫内发育迟缓（IUGR）的大鼠脑损伤模型，孕期补充维生素B12，观察仔鼠体格生长规律、脑结构变化及脑组织中髓鞘碱性蛋白（MBP）的动态表达，以探讨孕期补充维生素B12对IUGR仔鼠脑损伤的影响。 方法：选取健康三月龄Sprague-Dawley（SD）大鼠56只，按照雌雄1：1的比例置于同一笼中交配。受孕成功的孕鼠随机分为正常对照组（CC）和IUGR实验组（S），再按孕期是否补充维生素B12，将实验组随机分为维生素B12干预组（SV）和非干预组（SC）。对照组（CC）母鼠自受孕后第1天开始给予21%正常蛋白饮食，而IUGR组（S）母鼠自受孕后第1天开始给予6%蛋白饮食，建立IUGR模型。同时维生素B12干预组（SV）母鼠自受孕后第1天开始给予维生素B12150ug/d灌胃，直至分娩。仔鼠生后由母鼠哺乳喂养，均给予母鼠21%正常蛋白饮食喂养、自由饮水。选择生后1日龄、7日龄、14日龄和21日龄4个时间点，每个时间点每组10只仔鼠，测量仔鼠体重、头臀长及脑湿重，并对各个时间点仔鼠留取脑组织，HE染色观察海马结构的变化，免疫组化半定量测定海马组织中MBP的表达水平，取海马用Westernblot检测海马组织中髓鞘碱性蛋白（MBP)含量的动态表达，同时检测母鼠分娩当天及各个时间点仔鼠血清中维生素B12（VB12）、同型半胱氨酸（Hcy）的表达水平。 结果： 1、三组孕鼠所分娩的仔鼠IUGR发生率及围产期死亡率比较：与对照组（CC）相比，SV、SC组仔鼠IUGR发生率明显升高（P0.01），而SC组、SV组仔鼠IUGR发生率无明显差异（P0.05）。三组仔鼠围产期死亡率差异无统计学意义(P0.05)。 2、三组仔鼠体重、头臀长及脑重变化的动态比较：与对照组（CC）相比，1日龄IUGR组（SV、SC）仔鼠形体瘦小，，体重、头臀长、脑湿重均降低（P0.01），7日龄及14日龄时，SV、SC组体重、头臀长、脑湿重仍落后于CC组（P0.05），经追赶生长，到21日龄时，SV、SC组体重、头臀长与CC组相比无明显差异（P0.05），但脑湿重仍存在差异（P0.05）。IUGR组中，维生素B12干预组（SV）仔鼠在1日龄、7日龄、14日龄和21日龄时体重、头臀长、脑湿重均高于非干预组（SC），但差异并不显著（P0.05）。 3、三组大鼠海马组织结构HE染色的变化：1日龄时，与对照组（CC）相比，IUGR组（S）仔鼠海马神经元细胞排列疏松、紊乱，部分细胞水肿明显，出现空泡，核固缩细胞比较多，神经元细胞数目减少。到21日龄时，IUGR组（S）细胞水肿逐步减轻，但细胞排列相对疏松、紊乱，细胞数目未见明显增多。1日龄到21日龄，与SC组比较，SV组仔鼠海马神经元细胞数目、出现空泡的细胞数目均较少，细胞排列形态相对致密、规则。 4、三组大鼠海马组织中髓鞘碱性蛋白（MBP）的表达变化：三组海马组织中MBP在1日龄、7日龄时均无明显表达，从14日龄时表达逐渐增加，21日龄时最强；Western blot检测也显示同样的表达趋势。同样，在14日龄和21日龄三组中MBP的表达，SC组表达最低，其次为SV组，CC组的表达最高。 5、三组孕鼠分娩后及仔鼠血清中维生素B12（VB12）、同型半胱氨酸（Hcy）水平：三组孕鼠分娩后，SV组VB12水平高于SC、CC组（P＜0.01），SC组孕鼠VB12水平低于CC组（P＜0.01），而Hcy与VB12的表达趋势相反（P＜0.05）；随着日龄渐增加，1日龄到14日龄，各组仔鼠B12水平逐渐降低，Hcy水平逐渐升高，到21日龄时VB12下降、Hcy上升均不明显；SV组仔鼠VB12水平高于CC组、SC组（P＜0.05），SC组仔鼠VB12水平低于CC组（P＜0.05），同时仔鼠中Hcy与VB12的表达趋势相反（P＜0.05）。 结论： 1、孕期低蛋白（6%）喂养饮食法建立IUGR大鼠脑损伤模型，仔鼠脑重降低，海马神经元细胞数目减少、细胞排列疏松，制模可靠，效果比较理想。 2、IUGR仔鼠生后予正常喂养，体格上可实现追赶生长，但神经元数目、脑重及脑组织MBP的表达落后于正常仔鼠。 3、孕期补充维生素B12可提高孕鼠及仔鼠体内维生素B12水平，降低孕鼠、仔鼠体内Hcy水平。 4、孕期补充维生素B12，不能降低宫内发育迟缓发生率，但有助于宫内发育迟缓仔鼠体重、头臀长和脑重的增长，神经元细胞形态的改善及脑组织MBP的表达，提示维生素B12可能对宫内发育迟缓脑损伤具有改善作用。
[Abstract]:Objective: the pregnant mice of low protein diet (6% protein) preparation of intrauterine growth retardation (IUGR) in rats with brain injury model, vitamin B12 supplementation during pregnancy, physical observation of rat growth rule, changes in myelin basic protein and brain structure in the brain (MBP) dynamic expression, to explore the effect of vitamin B12 supplementation during pregnancy IUGR damage in neonatal rat brain.
Methods: 3 month old healthy Sprague-Dawley (SD) 56 rats, according to the proportion of male and female 1:1 in the same cage. The pregnant rats were randomly divided into normal control group (CC) and IUGR group (S), according to whether vitamin B12 supplementation during pregnancy, the experimental group were randomly divided into vitamin B12 the intervention group (SV) and non intervention group (SC). The control group (CC) rats from pregnant first days after feeding 21% normal protein diet, and group IUGR (S) rats from first days after conception to give 6% protein diet to establish IUGR model. At the same time vitamin B12 intervention group (SV) from maternal pregnancy first days after giving vitamin B12150ug/d orally, until delivery. The offspring by maternal breastfeeding, mothers were given 21% normal protein diet, drinking water freely. 1 day age after birth, 7 days, 14 days and 21 days 4 time points, each time point of 10 rats in each group rats, rats body measurement Heavy head, rump and brain weight, and each time point for rat brain tissue, to observe the changes of hippocampal structure by HE staining, the expression level of semi quantitative immunohistochemical determination in the hippocampus of MBP and myelin basic protein in hippocampus was detected by Westernblot in hippocampus (MBP) expression of dynamic content, at the same time detection of maternal serum vitamin delivery day and each time point in B12 rats (VB12), homocysteine (Hcy) levels.
Result锛

本文编号：1497006