缓激肽受体介导的NO信号通路在卵巢癌发生中的作用

发布时间：2018-06-01 08:39

  本文选题：阿霉素 + HOE-140　； 参考：《河北医科大学》2014年硕士论文

【摘要】：目的:卵巢恶性肿瘤是女性生殖器官常见的三大恶性肿瘤之一，由于卵巢位于盆腔深部，早期病变不易发现，晚期病例也缺乏有效的治疗手段，因此卵巢恶性肿瘤致死率居妇科恶性肿瘤首位，已成为严重威胁妇女生命和健康的主要肿瘤。卵巢癌的组织类型繁多，其中上皮性卵巢癌占卵巢恶性肿瘤的85~90%，其发病隐匿，早期无症状，发现时往往已是晚期，这使得该肿瘤的早诊早治显得异常困难。 对于卵巢癌的治疗，适当的手术配合有效化疗可大大提高病人的存活率，其中上皮性卵巢癌对化疗药物较敏感。其传统的化疗方法是紫杉醇加铂类，但是多数患者停药一段时间后会复发，这可能和卵巢癌的发病机制尚不清楚和肿瘤耐药有关。 缓激肽(BK)是机体炎症时释放的一种血管活性肽，，通过和细胞膜上的B l受体和B2受体结合而起效。对卵巢癌、胃癌和肝癌等多种病人的胸腹腔渗液检查均发现高浓度的BK水平，对其受体的研究发现，B1受体和B2受体单独或同时在人类多种肿瘤细胞呈高表达。这些研究提示，B1R、B2R或二者均可参与肿瘤的增殖。但BK受体亚型在卵巢癌组织的表达尚未有一致报道。 在本部分研究中，我们首先就上皮性卵巢癌患者和卵巢良性肿瘤患者经手术切除的肿块组织中BK受体亚型及其下游的主要信号分子NO产生的酶eNOS和iNOS的表达进行了比较研究。在此基础上，观察了B2受体的特异性拮抗剂HOE-140单独或联合应用阿霉素（DOX）对人卵巢癌细胞SKOV3的影响及可能的作用机制。该研究有望找到更好的肿瘤靶位，从而改善卵巢癌患者的生存质量。 方法： 1卵巢癌组织中缓激肽B1受体、B2受体及eEOS、iNOS的表达 选取临床确诊的卵巢癌患者及卵巢上皮性良性肿瘤患者各20例。年龄在35~55岁之间。无高血压、糖尿病等内科疾病及遗传病病史。 采用患者手术切除后经病理确诊为卵巢上皮性良性肿瘤及上皮性卵巢癌患者的卵巢标本，免疫组化法检测卵巢癌组织中B1、B2及eNOS及iNOS的表达。 2血清中NO活性测定 在治疗前抽取初步诊断为卵巢癌的患者静脉血液5ml20例，（其中15例术后病理证实为上皮性卵巢癌），另抽取正常人静脉血液5ml20例，离心，分离上清液，采用NO试剂盒测定血液中NO含量。 3DOX和HOE-140单独或联合应用对SKOV3细胞增值的影响 采用MTT法检测不同浓度的阿霉素（3,10,30,100和300μmol/L）或HOE-140(0.01,0.1,1,10和100μmol/L)和SKOV3作用24小时后细胞的存活情况。在此基础上，比较二者联合用药（DOX10μmol/L+HOE14010μmol/L）和分别单独应用相同剂量的DOX或HOE-140对SKOV3的细胞毒作用。 4DOX和HOE-140单独或联合应用对SKOV3细胞凋亡的影响 将SKOV3细胞分别与DOX10μmol/L、HOE-14010μmol/L或联合应用DOX10μmol/L+HOE-14010μmol/L作用24h，采用原位末端标记技术观察(TUNEL试剂盒)细胞凋亡情况。 结果： 1卵巢组织标本B1、B2受体、eEOS和iNOS的表达 对临床上确诊为卵巢癌患者和卵巢良性肿瘤患者手术后切取的卵巢组织进行免疫组化结果显示，B1受体在良性卵巢组织中几乎不表达，B2受体在良性卵巢组织中有表达，eNOS在良性卵巢组织中有少量表达，iNOS无明显表达，和卵巢良性肿瘤患者的卵巢组织相比，卵巢癌组织细胞中B1受体、B2受体、eNOS及iNOS均呈高表达。 2血清中NO含量测定 对所采集血清中NO含量测定结果表明，卵巢癌患者血清中NO含量显著高于正常人血清中的含量（P0.01）。 3对SKOV3细胞增殖的影响 MTT法检测结果显示，将不同浓度的DOX（3,10,30,100和300μmol/L）或HOE-140(0.01,0.1,1,10和100μmol/L)与SKOV3共同孵育24小时后，二者均对SKOV3细胞的增殖有一定的抑制作用。其中HOE-14010μmol/L的抑制率是12.7%，而DOX10μmol/L的抑制率为26.8%。二者联合应用的抑制率为37.5%，其联合应用的对SOV3细胞的抑制作用明显强于二者单独应用（P均0.01）。 4对SKOV3细胞凋亡的影响 Tunnel染色显示，单独应用10μmol/L HOE-140或DOX处理SKOV3细胞24小时均可诱导SKOV3细胞的凋亡，两者联合应用诱导SKOV3细胞的凋亡作用明显强于单独应用。 结论： 1上皮性卵巢癌患者血清中NO含量较正常人为高，其卵巢组织中B1、B2、eNOS及iNOS的表达都增加; 2HOE-140和DOX联合或单独应用均可抑制卵巢癌SKOV3细胞的增殖，其机制可能和促进细胞凋亡和抑制NO产生有关。
[Abstract]:Objective: ovarian malignant tumor is one of the three common malignant tumors in female genital organs. Because the ovary is located in the deep pelvic cavity, the early pathological changes are not easy to be found, and the late cases are also lack of effective treatment. Therefore, the mortality rate of ovarian malignant tumor is the first one in gynecologic malignant tumor, and has become the major tumor that seriously threatens the life and health of women. There are various types of tissue in ovarian cancer, among which epithelial ovarian cancer accounts for 85~90% of ovarian malignant tumors. The pathogenesis is occult, early asymptomatic, and often late in discovery, which makes the early diagnosis of the tumor very difficult.
For the treatment of ovarian cancer, proper operation and effective chemotherapy can greatly improve the patient's survival rate, of which epithelial ovarian cancer is more sensitive to chemotherapeutic drugs. The traditional chemotherapy method is paclitaxel plus platinum, but most patients relapse after a period of withdrawal, which may not be known to the pathogenesis of ovarian cancer and the tumor resistance. Of
Bradykinin (BK) is a vasoactive peptide released during the inflammation of the body, which is effective by combining with the B l receptor and B2 receptor on the cell membrane. A high concentration of BK levels is found in a variety of patients with ovarian cancer, gastric cancer, and liver cancer, and the study of its receptors, B1 receptor and B2 receptor alone or at the same time in human multiple swollen. The tumor cells are highly expressed. These studies suggest that B1R, B2R, or two may participate in the proliferation of tumors. However, the expression of BK receptor subtypes in ovarian cancer has not yet been reported.
In this part, we compare the expression of the BK receptor subtype and the expression of the enzyme eNOS and iNOS produced by the main signal molecule NO downstream of the excised tumor and the patients with epithelial ovarian cancer and benign ovarian tumors. On this basis, the specific antagonist HOE-140 of the B2 receptor, HOE-140 alone or in conjunction, is observed. The effect of adriamycin (DOX) on human ovarian cancer cell SKOV3 and its possible mechanism of action. This study is expected to find a better tumor target and improve the quality of survival of ovarian cancer patients.
Method锛

本文编号：1963563