HMGB1与卵巢癌疾病诊断及疾病进展的相关性研究

发布时间：2021-03-24 19:24

目的高迁移率族蛋白(HMGB1)作为炎症反应因子,在败血症、关节炎等疾病中都发挥促炎作用。最近研究发现,HMGB1在多种肿瘤中高表达,对肿瘤的生长、迁移、侵袭发挥重要作用。本研究探讨高迁移率族蛋白(HMGB1)在上皮性卵巢癌、卵巢良性疾病及健康人血浆中的表达情况及与临床治疗的关系,通过RNA干扰抑制探讨HMGB1对卵巢癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响,观察高迁移率族蛋白(HMGB1)对肿瘤血管生成的体外调节作用。方法 1.通过ELISA方法分别检测105例卵巢癌患者治疗前及临床缓解期,46例卵巢良性疾病患者,33例健康女性血浆中HMGB1表达水平,研究高迁移率族蛋白(HMGB1)在上皮性卵巢癌、卵巢良性疾病及健康人血清中的表达情况及与临床治疗的关系。 2.靶向HMGB1基因的慢病毒载体转染卵巢癌细胞SKOV3、A2780,荧光显微镜观察转染效果。 3.利用real-time RT-PCR和Western blot方法检测卵巢癌细胞中HNGB1mRNA及蛋白的沉默效果。 4.CCK8法检测细胞增殖情况,HMGB1沉默后卵巢癌细胞增殖能力的变化。 5. Transwell小室模型检测HMGB1沉默后卵巢癌细胞迁移和侵袭能力的改变。 6.通过CCK8检测不同浓度hrHMGB1和hrVEGF-C刺激下HUVECs细胞的体外增殖能力。 7.通过Transwell、室模型实验检测不同浓度hrHMGB1和hrVEGF-C刺激下HUVECs细胞的体外迁移能力。 8.成管实验检测不同浓度hrHMGB1和hrVEGF-C刺激下HUVECs细胞的体外成管能力。结果 1.卵巢癌组HMGB1水平明显高于良性肿瘤组与健康组(P0.01), HMGB1水平与卵巢癌疾病分期相关,卵巢癌患者治疗后血浆HMGB1明显下降(P0.01)。 2. ShRNA沉默HMGB1的表达可以降低卵巢癌细胞的增殖、侵袭、迁移能力。 3. HMGB1可以在体外促进血管内皮细胞的增殖、迁移、成管能力,且其促进作用呈剂量依赖关系。作为阳性对照的VEGF-C有明显促血管生成的作用。结论 1.卵巢癌患者血浆HMGB1水平较良性患者及健康人高,并随疾病分期的升高而升高,卵巢癌患者治疗缓解后血浆HMGB1下降,可以推测HMGB1与卵巢癌发生发展密切相关,血浆HMGB1的检测有希望成为卵巢癌诊断监测的新方法。 2.沉默HMGB1基因后可显著抑制卵巢癌细胞体外增殖、侵袭和迁移能力,提不HMGB1可作为卵巢癌基因治疗的有效靶点并且ShRNA可能为卵巢癌基因治疗开辟新思路。 3. HMGB1和VEGF-C均为血管生成因子,可以促进血管生成和肿瘤血道转移,有望成为肿瘤治疗中抑制转移的新方向。
【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R737.31

文章目录

中文摘要

Abstract

缩略语/符号说明

前言

研究现状、成果

研究目的、方法

一、HMGB1对卵巢癌诊断价值的研究

1.1 对象和方法

1.1.1 ELISA检测血浆HMGB1表达水平

1.2 结果

1.2.1 卵巢癌、卵巢良性疾病和健康人血浆HMGB1水平测定

1.2.2 HMGB1表达与上皮性卵巢癌临床病理特征的关系

1.2.3 HMGB1表达与上皮性卵巢癌临床治疗的关系

1.3 讨论

1.3.1 上皮性卵巢癌与卵巢良性疾病、健康人血浆中的水平

1.3.2 HMGB1表达与上皮性卵巢癌临床病理特征的关系

1.4 小结

二、HMGB1对卵巢癌细胞生物学行为的影响

2.1 对象和方法

2.1.1 细胞培养和细胞转染

2.1.2 RT-PCR检测卵巢癌细胞中HMGB1mRNA的表达

2.1.3 Westem blot检测卵巢癌细胞中HNGB1蛋白表达

2.1.4 CCK8检测卵巢癌细胞增殖

2.1.5 迁移实验

2.1.6 侵袭实验

2.2 结果

2.2.1 SKOV3、A2780细胞转染效率

2.2.2 RT-PCR结果分析

2.2.3 Western blot结果

2.2.4 CCK8检测细胞生长情况

2.2.5 体外迁移实验

2.2.6 体外侵袭实验

2.3 讨论

2.3.1 HMGB1对卵巢癌细胞增殖能力的影响

2.3.2 HMGB1对卵巢癌细胞侵袭和迁移能力的影响

2.4 小结

三、HMGB1对卵巢癌转移相关血管生成的作用

3.1 材料和方法

3.1.1 细胞株和培养基

3.1.2 材料、仪器

3.1.3 实验方法

3.2 结果

3.2.1 CCK8实验结果

3.2.2 Transwell小室迁移实验结果

3.2.3 Matrigel模型成管实验

3.3 讨论

3.4 小结

结论

参考文献

发表论文和参加科研情况说明

综述 HMGB1——肿瘤治疗新方向

综述参考文献

致谢

【参考文献】