H3乙酰化修饰调控RAR-β2的表达与宫颈病变的相关性

发布时间：2018-10-11 15:08

【摘要】：研究背景： 子宫颈癌是女性生殖系统高发的恶性肿瘤之一，近年来该病的发病趋势呈年轻化现象，严重威胁女性身体健康，并影响生活质量。宫颈癌的发生发展是多种因素和多种基因共同参与的复杂过程，目前已经明确宫颈癌的始动因素主要为HPV持续感染，病毒基因组整合宿主细胞DNA后合成的E6/E7蛋白介导P53和Rb泛素化降解，激活端粒酶活性，导致宫颈上皮细胞脱离正常的分化程序、进入异常细胞周期、发生恶性转化。HPV转化细胞首先发生宫颈上皮内瘤变（cervicalintraepithelial neoplasia，CIN），经过CINⅠ、Ⅱ、Ⅲ，最终发展为宫颈癌。HPV转化细胞除了可引起P53和Rb蛋白水平下调外，还会导致多种基因表达异常，抑癌基因RAR-β2就是其中的关键基因之一。 RAR-β2是促进上皮细胞分化的重要调控因子，也是介导维甲酸发挥调控上皮细胞生长分化凋亡方面的关键受体，通过诱导分化，具有一系列的抑癌作用，多种肿瘤中均呈现降低或缺失现象，被认为是一个抑癌基因，在肿瘤的演进中扮演关键的角色。RAR-β2的表达可以诱导宫颈癌HeLa、SiHa细胞分化，降低其恶性生物学行为，通过转染RAR-β2的肺癌细胞发现，RAR-β2诱导肺癌细胞分化而增加凋亡，其缺失与肿瘤组织的分化程度有关。上皮细胞是通过正常的分化走向正常的生理衰老死亡，而不断的进行新陈代谢。Involucrin作为上皮细胞终末分化早期的一个标记，也是肿瘤组织分化程度的一个标记。只有在上皮细胞分化成熟时才表达，肿瘤组织中细胞异型性增加、分化异常，呈去分化状态，Involucrin的表达也就随之减少，组织分化程度逐渐降低。 表观遗传是由生物学家Conrad Waddington在1939年首次提出，目前，表观遗传被定义为DNA序列不发生变化，而基因表达却发生了可遗传的改变，主要包括DNA甲基化、组蛋白修饰、染色质重塑、非编码RNA等等，其中组蛋白乙酰化修饰是尤为重要，是一种重要基因表达调控的模式。通常认为组蛋白氨基末端赖氨酸残基高度乙酰化使染色质结构松散，DNA与组蛋白八聚体解离，核小体结构松弛，从而使各种转录因子和协同因子能与DNA结合位点特异性结合，有利于基因转录激活，而组蛋白低乙酰化使染色质结构卷缩导致基因沉默或抑制，组蛋白的高乙酰化和低乙酰化动态平衡的调控靶基因的稳定表达，维持细胞正常的生理功能和表型。当组蛋白乙酰化状态失衡，即乙酰化水平降低时，将引起相应的染色质结构和基因转录表达异常，影响细胞周期、分化、增殖、凋亡相关基因的表达，而导致肿瘤的发生和进展，是肿瘤病理生理过程中重要的分子事件之一。宫颈癌发生过程中，表观遗传改变不仅可影响HPV致癌基因的异常表达，而且还可导致宿主细胞多个癌基因的激活和抑癌基因的失活。 本研究利用临床组织标本检测组蛋白乙酰化修饰水平与抑癌基因RAR-β2在不同病变级别宫颈组织中的表达情况，分析两者的相关性及与宫颈病变程度、临床病理特征的关系，探讨两者在宫颈癌发生发展中的作用。 目的： 探讨组蛋白乙酰化修饰水平对RAR-β2表达的调控作用，并分析其与宫颈病变程度之间的相关性。 方法： 1.分别选取正常宫颈20例、CINⅡ-Ⅲ29例、子宫颈鳞状细胞癌（cervical squamouscell carcinoma,SCC）80例存档于病理科的石蜡包埋组织标本，采用免疫组织化学染色SP法检测AcH3、RAR-β2、Involucrin的表达水平，半定量积分法判定染色阳性结果。 2.收集正常宫颈6例、CINⅡ-Ⅲ8例、SCC10例新鲜组织标本，采用Western blotting检测AcH3、RAR-β2、Involucrin的表达水平，胶片成像条带灰度分析显影结果。 3.分析数据采用SPSS13.0统计学软件行χ2检验和t检验，各指标间相关性采用Pearson correlation分析，以P＜0.05为差异有统计学意义。 结果： 1.免疫组化检测AcH3、RAR-β2、Involucrin在正常宫颈、CINⅡ-Ⅲ和SCC组织中的表达显示，随着宫颈病变程度加重，三者的表达逐渐降低，甚至缺失，各组间差异均有统计学意义（P＜0.05）。 2.组蛋白乙酰化水平与RAR-β2表达的呈正相关性（r=0.734，P＜0.05），随着宫颈病变的进展，两者的表达同步降低。 3.组蛋白乙酰化水平和RAR-β2的表达均与宫颈病变程度呈负相关性（r=－0.547（AcH3），r=－0.585（RAR-β2），P＜0.05），，即宫颈病变程度越重，两者的表达越低。 4.Western blotting检测AcH3、RAR-β2、Involucrin在正常宫颈、CINⅡ-Ⅲ和SCC组织中的表达显示，与免疫组化结果一致，即随着宫颈病变程度加重，三者的表达依次降低，甚至缺失，各组间差异均有统计学意义（P＜0.05）。 5.免疫组化检测AcH3、RAR-β2、Involucrin在SCC高、中、低分化组织中的表达显示，三者在高分化组织中的表达高于中、低分化组织，低分化组织中三者的表达明显缺失，即随着分化程度的降低，三者的表达依次降低，甚至缺失。 6.组蛋白乙酰化水平、RAR-β2的表达在SCC临床病理特征中分析显示，两者与临床分期、有无盆腔淋巴结转移无关，而与肿瘤组织的分化程度有关，两者在高、中、低分化组织中的比较存在明显差异，具有统计学意义（P＜0.05）。 7.组蛋白乙酰化水平与RAR-β2的表达在SCC组织中呈正相关性（r=0.427，P＜0.05）。 8.Western blotting检测AcH3、RAR-β2、Involucrin在SCC高、中、低分化组织中的表达显示，与免疫组化结果一致，即随着分化程度的降低，三者的表达依次降低，甚至缺失，各组间差异均有统计学意义（P＜0.05）。 结论： 1.宫颈上皮细胞RAR-β2的表达受组蛋白乙酰化修饰水平的调控。 2.组蛋白乙酰化程度和RAR-β2的表达水平与宫颈病变进展密切相关，可作为宫颈病变进展风险和预后的评价指标及可能的治疗靶点。
[Abstract]:Background of the study: Cervical cancer is one of the most prevalent malignant tumors in the female reproductive system. In recent years, the trend of the disease is young, which seriously threatens the health of women and affects life. The development of cervical cancer is a complex process involving multiple factors and multiple genes involved in the development of cervical cancer. It is now clear that the initial dynamic factors of cervical cancer are HPV persistent infection, and the E6/ E7 protein synthesized after the whole host cell DNA of the viral genome mediates the degradation of P53 and Rb ubiquitination, and activates telomerase. Activity, cause cervical epithelial cells to break out of normal differentiation procedure, enter abnormal cell cycle, occur malignant First, cervical intraepithelial neoplasia (CIN) occurs in HPV-transformed cells. CIN 鈪

本文编号：2264508