PPARγ激动剂对PCOS患者颗粒细胞中P450arom的调控作用

发布时间：2018-12-13 22:11

【摘要】：多囊卵巢综合征（polycystic ovary syndrome, PCOS）是一种生育期女性中常见的内分泌异常的代谢综合征，在全世界范围内发病率约5%-10%且逐渐上升。PCOS非常重要的一个内分泌特征即是高雄激素血症，能够导致排卵障碍、不孕、肥胖、糖尿病等一系列临床症状，严重影响妇女身心健康。细胞色素P450芳香化酶（cytochrome P450aromatase, P450arom）是卵巢颗粒细胞中催化雄激素生成雌激素的最重要的限速酶之一，与高雄激素血症的发生密切相关，，其功能或调控机制若发生异常，则会导致雄激素水平变化。过氧化物酶体增殖物激活受体γ(peroxisome proliferater-activated receptor, PPARγ)是一种核内受体，许多研究表明，PPARγ被激活后能够对P450arom的表达及活性产生抑制作用，提示PPARγ对P450arom具有调控作用，但具体机制尚不清楚。转化生长因子-β/Smads信号途径（Transforming growth factor-β/Smadsignaling pathway）在人体中参与多种生物学过程，在卵母细胞的成熟、雌激素的分泌以及颗粒细胞的增殖等过程中均发挥着重要的作用。Smad2蛋白是TGF-β/Smads途径下游最为重要的核内信号转导分子，被激活发生磷酸化后发挥作用，因此学者们常用Smad2蛋白的磷酸化水平来代表TGF-β/Smads的激活程度。有研究表明：TGF-β/Smads信号途径能够调节P450arom的基因CYP19的表达从而促进P450arom的表达。在人体其他组织中，PPARγ能够通过抑制Smad2蛋白磷酸化来阻断TGF-β/Smads信号途径从而调控目的基因的表达。我们行前期研究发现：与正常对照组相比，PCOS患者的卵巢颗粒细胞中PPARγ表达明显增高，p-Smad2蛋白、P450arom表达明显降低，且PPARγ表达与p-Smad2蛋白表达负相关，P450arom表达与p-Smad2蛋白表达正相关。那么在卵巢中，PPARγ是否通过影响TGFβ/Smads信号途径从而影响P450arom的表达，导致PCOS患者雄激素水平升高？本课题将就这一问题行进一步的深入研究。目的 1.测定雄激素正常的PCOS组（NA-PCOS）、伴高雄激素血症的PCOS组（HA-PCOS）以及正常对照组患者经过不同浓度PPARγ激动剂（罗格列酮）干预处理的体外培养卵巢颗粒细胞中PPARγ、P450arom mRNA表达，Smad2、p-Smad2蛋白表达水平。 2.探讨卵巢颗粒细胞中PPARγ对P450arom表达的调控作用及TGFβ/Smads信号途径是否参与其中。材料与方法选择2013.11~2014.02在郑州大学第一附属医院生殖中心行体外受精-胚胎移植（in vitro fertilization-embryo transfer, IVF-ET）助孕治疗的患者共30例。将其分为三组：第一组为雄激素正常的PCOS组（NA-PCOS组）患者共10例，第二组为PCOS伴高雄激素血症（HA-PCOS组）患者共10例，第三组为实验对照组即同期因输卵管因素导致不孕的患者10例。所有患者于月经第2-4天以及HCG注射日空腹抽取外周静脉血，采用电化学发光法检测性激素水平；所有患者均使用我中心常规的标准长方案促排卵。于取卵当天收集患者所有卵泡液，立即提取颗粒细胞并行体外培养，将每例患者的颗粒细胞分为三组，分别给予浓度为0、1、10nmol/L的罗格列酮进行干预并继续培养，培养48h后的颗粒细胞再分为两部分，第一部分提取颗粒细胞总RNA，使用RT-PCR测定PPARγ、P450arom mRNA表达；第二部分使用Western blot测定Smad2、p-Smad2蛋白的表达水平。结果 1.三组比较，患者的不孕年限、年龄、血清基础雌二醇（E2）及卵泡刺激素（FSH）、HCG注射日每卵泡血清E2水平、Gn使用的时间及Gn用量均无差异（P＞0.05）；NA-PCOS组与HA-PCOS组的血清黄体生成素（LH）、睾酮（T）水平均明显高于对照组（P＜0.05）；HA-PCOS组的LH、T水平高于NA-PCOS组（P＜0.05）。 2.加入浓度为0nmol/L的罗格列酮时，NA-PCOS组与HA-PCOS组患者卵巢颗粒细胞PPARγ mRNA表达水平较正常对照组显著升高（P＜0.05），P450arommRNA表达水平与p-Smad2蛋白水平则均显著降低（P＜0.05）。HA-PCOS组与NA-PCOS组相比，PPARγ mRNA表达水平高而P450arom mRNA表达水平、p-Smad2蛋白水平低。三组间Smad2蛋白水平未见明显差异。 3.加入浓度为1、10nmol/L的罗格列酮时，三组的PPARγ mRNA表达水平均随罗格列酮浓度增高而表达增多，而P450arom mRNA表达水平与p-Smad2蛋白水平均随PPARγ mRNA表达增多而降低。且三组中HA-PCOS组相较于其他两组PPARγ mRNA表达水平均高（P＜0.05），P450arom mRNA表达水平与p-Smad蛋白水平均低（P＜0.05）。三组间Smad2蛋白水平无明显差异。结论 1．PPARγ可能通过阻碍Smad2蛋白磷酸化从而抑制了P450arom表达。 2．在卵巢颗粒细胞中TGF-β/Smads信号途径可能参与了PPARγ对P450arom的调控作用。
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【学位授予单位】：郑州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R711.75

【参考文献】