稀土氯化镧增强卵巢癌顺铂耐药细胞的敏感性及其分子机制的体外研究

发布时间：2019-05-07 17:05

【摘要】：目的:卵巢癌是女性生殖系统中常见的恶性肿瘤之一。临床研究表明卵巢癌患者术后接受化疗治疗是必不可少的,而以铂类为基础的化疗方案被视为标准方案,在临床中广泛使用。尽管化疗药物不断更新,但患者5年生存率仍未得到有效提高,其主要原因是肿瘤细胞耐药。本研究旨在探讨稀土氯化镧增强卵巢癌顺铂耐药细胞的顺铂敏感性,并对其相关机制做初步研究,为顺铂耐药性卵巢癌患者的治疗提供新思路和理论依据。方法:1、MTT法检测不同浓度顺铂(0.01、0.1、1、10、100μg/mL)对COC1和COC1/DDP细胞的生长抑制率,并计算DDP的半数抑制浓度(IC50)及耐药指数(RI)。2、MTT法检测不同浓度氯化镧(0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0、4.5、5.0μmol/L)培养COC1和COC1/DDP细胞48h后的增殖抑制率;用上述浓度的氯化镧分别与相应的IC50浓度DDP联合培养COC1和COC1/DDP细胞48h,MTT法检测氯化镧对细胞的增殖抑制率。3、分别用0、0.5、1.5、4.0μmol/L氯化镧培养COC1和COC1/DDP细胞48h,用透射电子显微镜观察细胞的形态学变化。4、COC1和COC1/DDP细胞分别设为对照组、顺铂组、氯化镧组、氯化镧+顺铂组,用流式细胞仪检测不同实验组COC1和COC1/DDP细胞的凋亡率。5、COC1/DDP细胞设为对照组、顺铂组、氯化镧组、氯化镧+顺铂组,培养48h后用Western Blot法检测不同实验组细胞中ERCC1、Ki67、CDK6和c-Cbl蛋白的表达情况。结果:1、顺铂对COC1和COC1/DDP细胞均有明显的生长抑制作用,并随着顺铂浓度的增加而增强,有明显的剂量依赖性。COC1细胞株的IC50为2.06μg/ml,COC1/DDP细胞株的IC50为23.08μg/ml,耐药指数为11.19倍。2、MTT法检测细胞增殖抑制率:COC1细胞组,氯化镧对细胞的增殖抑制率随浓度的增加而增强,当氯化镧浓度为1.5μmol/L及其以下时,药物对细胞的抑制率低,与对照组相比P0.05,氯化镧浓度为1.5μmol/L以上时,药物对细细胞的抑制率较高,并随氯化镧浓度增高而提高,与对照组比较P0.05;COC1+DDP细胞组,氯化镧浓度低于1.5μmol/L时,药物对细胞的抑制率仍低,与对照组比较P0.05,但其抑制率随氯化镧浓度的升高而增强,当氯化镧浓度为1.5μmol/L及其以上时,药物对细胞的抑制率明显升高,与对照组比较P0.05。COC1/DDP细胞中观察结果与COC1细胞类似。故认为1.5μmol/L氯化镧单药对卵巢癌细胞无明显毒副作用,而与顺铂联合使用可以明显增强细胞毒性作用,选此浓度为增敏效果最佳浓度,用于后续实验研究。3、透射电子显微镜下观察显示:0和0.5μmol/L氯化镧组,COC1和COC1/DDP细胞形态正常,核膜完整,细胞器和细胞核结构清晰,胞内无空泡,两组间差异不明显。1.5μmol/L氯化镧组两株细胞均出现微量皱缩,细胞状态较前2组状态稍差。4μmol/L氯化镧组细胞凋亡严重,出现凋亡小体。4、流式细胞术检测凋亡率:对照组、顺铂组、氯化镧组、氯化镧+顺铂组处理后COC1细胞的凋亡率分别为5.52±0.92%、25.40±4.38%、7.22±2.55%、27.54±4.03%;对照组、顺铂组、氯化镧组、氯化镧+顺铂组处理后COC1/DDP细胞的凋亡率分别为4.60±1.11%、18.24±2.81%、5.59±1.73%、29.12±5.38%。变化趋势与MTT法检测结果一致。5、Western Blot法检测结果示:ERCC1、Ki67、CDK6和c-Cbl蛋白在对照组、氯化镧组、顺铂组、氯化镧+顺铂组中的表达均逐渐下调,呈下降趋势。与对照组相比,氯化镧组ERCC1、Ki67、CDK6和c-Cbl 4种蛋白表达均下调,但无统计学差异(P0.05);顺铂组和氯化镧+顺铂组中,ERCC1、Ki67、CDK6和c-Cbl蛋白表达显著低于对照组,差异有显著性(P0.01);氯化镧+顺铂组与顺铂组比较,4种蛋白表达均明显下调,差异亦有统计学意义(P0.01)。结论:1.5μmol/L的氯化镧对卵巢癌COC1和COC1/DDP细胞均无明显抑制作用,但与顺铂共培养可增强顺铂对卵巢癌COC1和COC1/DDP细胞的抑制增殖作用及促进凋亡作用。氯化镧可能通过调节ERCC1、Ki67、CDK6及c-Cbl的表达,从而提高卵巢癌耐顺铂细胞对顺铂的敏感性,但其具体调节机制还需更多研究。
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【学位授予单位】：南昌大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R737.31

【参考文献】