宫内高糖导致子代肝脏代谢异常与慢性肝损伤机制的研究
发布时间：2020-03-19 16:23
【摘要】：第一部分妊娠期糖尿病小鼠子代模型的建立及肝脏代谢基因表达情况目的:研究宫内高糖环境出生的子一代小鼠糖代谢状况,并探讨其是否与肝脏糖脂代谢异常相关。材料和方法:STZ建立妊娠期糖尿病(gestationaldiabetesmellitus,GDM)小鼠模型,子一代(GDM-F1)出生后由正常母鼠哺乳至3周后正常喂养。对成年后8周和20周的正常对照组及F1-GDM组进行糖耐量和胰岛素耐量试验;并提取肝脏组织的RNA,Real-Time PCR观察其与糖代谢相关基因表达情况。结果:GDM子一代小鼠在8周和20周与对照组相比均表现出糖耐量异常,并且存在轻微的胰岛素抵抗。GDM-F1肝脏组织糖原合成相关基因表达总体呈下降趋势,脂肪合成相关基因表达下降。结论:宫内高糖环境下出生的子一代小鼠葡萄糖耐量明显异常,肝脏糖代谢与脂肪合成相关基因表达异常,提示宫内高糖导致子代糖脂代谢紊乱可能是通过肝脏引起的。第二部分宫内高糖环境下出生的子一代小鼠肝脏免疫相关受体表达改变和慢性肝损伤目的:研究妊娠期糖尿病子一代小鼠肝脏免疫受体表达情况,从而判断高糖环境是否对子代造成慢性肝损伤。方法:分别取胎鼠,8周和20周子一代雄鼠,HE染色观察其肝脏受损情况。Trizol法提取总RNA,逆转录试剂盒进行逆转录实时定量PCR(Real-TimePCR)检测肝脏免疫受体IL-1β,IL-6r,CD36和CD248等mRNA的表达情况。提取肝脏组织总蛋白后,Western-blot观察20周子代小鼠IL-6r及其调控通路(JAK2/STAT3)蛋白水平表达情况,免疫组化观察IL-6r表达位置及水平。高糖环境培养小鼠肝细胞Hepal-6后Real-Time PCR检测其免疫介质的表达情况。结果:子代雄鼠胚胎时期及成年后肝脏IL-1β,IL-6r和CD248等mRNA水平表达均上调,其中胎鼠时期免疫受体上调较为明显,8周成年时差异略有减少,至20周小鼠免疫受体上调最为明显。Western-blot和免疫组化结果表明20周小鼠肝细胞表面IL-6r蛋白水平表达显著增加,JAK2/STAT3磷酸化水平上调细胞实验证实高糖培养的Hepal-6肝细胞免疫介质的表达明显上调。结论:宫内高糖环境可直接导致子代从胚胎时期开始肝脏免疫相关受体表达上调,揭示其炎症反应高于正常妊娠出生子代,这可能是促使成年至老年慢性肝损伤发病的重要原因。
【图文】：
浙江大学硕N学位论义逦第－部分１．３实验结果逡逑研究表明腹腔注射０．０１ｍｌ／ｇ胰岛素液后，血糖测定仪测定血糖值，逡逑相比于对照组８周的妊娠期糖尿病子代小鼠仅于３０ｍｉｎ，６０ｍｉｎ有轻微的胰岛素抵逡逑抗现象，随即恢复正常水平。而相比之下２０周龄小鼠S椧鹊核氐挚瓜窒蟾飨浴ｅ义，
本文编号：2590455
【图文】：
浙江大学硕N学位论义逦第－部分１．３实验结果逡逑研究表明腹腔注射０．０１ｍｌ／ｇ胰岛素液后，血糖测定仪测定血糖值，逡逑相比于对照组８周的妊娠期糖尿病子代小鼠仅于３０ｍｉｎ，６０ｍｉｎ有轻微的胰岛素抵逡逑抗现象，随即恢复正常水平。而相比之下２０周龄小鼠S椧鹊核氐挚瓜窒蟾飨浴ｅ义，
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