Hsp90抑制剂SNX-2112联合TRAIL诱导宫颈癌细胞凋亡的机制研究

发布时间：2020-03-21 12:46

【摘要】：肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)是一种肿瘤细胞凋亡诱导因子,可特异性诱导多种肿瘤细胞凋亡。然而,由于很多肿瘤细胞对TRAIL产生抗性,阻碍了TRAIL的临床应用,因此亟需开发能够增强TRAIL作用或克服其耐药性的药物制剂。本研究将本课题组开发的Hsp90抑制剂SNX-2112与TRAIL联合作用,探讨SNX-2112与TRAIL协同诱导宫颈癌细胞凋亡的作用及其机制。研究结果表明,SNX-2112可显著增强TRAIL对宫颈癌细胞的增殖抑制作用,SNX-2112与TRAIL联合在HeLa细胞中表现为协同作用。进一步的机制研究显示,SNX-2112在TRAIL抗性的HeLa细胞中可以增强TRAIL诱导的caspase依赖的细胞凋亡,并下调HeLa细胞内Bcl-2,Bcl-XL和FLIP等多个抗凋亡蛋白的表达水平,而HeLa细胞的死亡受体DR5表达水平则显著上调。通过siRNA沉默DR5的基因表达水平发现,SNX-2112和TRAIL联合作用诱导的HeLa细胞凋亡显著降低。此外,我们发现SNX-2112在HeLa细胞内可以通过抑制Akt/mTOR信号通路诱导自噬的发生。而采用BFA阻断自噬流则会抑制SNX-2112诱导的DR5上调。另一方面,通过使用ROS抑制剂NAC和p53抑制剂PFTα证实了自噬介导的DR5上调是由SNX-2112刺激的ROS-p53信号传导途径调控。另外,由SNX-2112诱导的JNK的激活也在增强联合用药诱导的细胞凋亡中发挥调控作用。综上所述,Hsp90抑制剂SNX-2112通过多个信号转导途径与TRAIL协同作用诱导宫颈癌细胞凋亡,从而克服宫颈癌细胞对TRAIL的耐药性。本研究结果为宫颈癌的治疗提供了新策略,并为Hsp90抑制剂SNX-2112作为TRAIL增敏剂的临床应用奠定了科学基础。
【图文】：

图 1.2.1 两种途径诱导的细胞凋亡[67]如图 1.2.1，外源性细胞凋亡途径独立于 p53 发生，需要结合促凋亡配体如 TRAIL。TR以与四种膜结合受体，包括 TRAIL-R1-R4，和一种可溶性受体（OPG）相结合。但是只RAIL-R1 和 TRAIL-R2 上含有细胞质死亡结构域（DD），而 TRAIL 与受体结合后需要通结构域来传递并触发下游凋亡信号。TRAIL-R3 和 TRAIL-R4 也结合 TRAIL，但由于缺D，它们不能启动信号传导。因此，它们又被称为 TRAIL 的诱饵受体。TRAIL 与 TRAIL-R1结合导致衔接子 FADD 和前体 caspase-8 和-10 的募集以快速形成 DISC。Pro-caspase-8 和切割形成 caspase-8 和-10，其激活效应子 caspase-3，，-6 和-7 使细胞凋亡。在 DISC 中，cF制 caspase-8 的活化，从而抑制下游凋亡信号的传导。内源性细胞凋亡途径响应细胞应激化疗和放疗后启动。这导致 DNA 损伤诱导的 p53 基因进一步激活促凋亡 Bcl-2 家族蛋白 BAK 和 BAX。结果，使得促凋亡蛋白细胞色素 c 和 Smac/DIABLO 从线粒体内释放到质中。细胞色素 c 会进一步与 APAF-1 形成蛋白质复合体，即凋亡小体。凋亡小体形成活 caspase-9，后者又激活效应子 caspase-3，-6 和-7，最终导致细胞凋亡的发生。此外

图 1.2.2 多种形式的 TRAIL 的应用[67]迄今为止，已经研究开发了许多重组人 TRAIL 以增强其杀伤肿瘤潜力。一种可溶性RAIL（杜拉内明）在非人类灵长类动物中具有约 30 分钟的短血清半衰期，并且其具有与相同的受体结合[68]。由于其体积小，全身递送的 TRAIL 可以通过肾脏迅速从体内清除[此这需要重复给药或更复杂的输送方法来维持治疗在循环中的有效水平，有待进一步研发。更重要的是，肿瘤细胞对 TRAIL 介导的杀伤作用反应并不一致。虽然许多肿瘤细胞RAIL 介导的凋亡敏感，但在某些肿瘤细胞中 TRAIL 具有非凋亡信号特性，其耐药性的发多种癌症中也极为常见[70; 71]。在一项体外研究中，研究 TRAIL 对多种癌细胞系的功效显多数情况下 TRAIL 表现出一定程度的细胞增殖抑制作用，但在 20%的细胞中没有明显作]。这些抗性可能是固有的（细胞总是耐受 TRAIL）或获得性的（曾经对 TRAIL 敏感的在重复暴露后已经变得耐受）。内源性和获得性 TRAIL 耐药性在建立临床有效的 TR
【学位授予单位】：暨南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R737.33

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本文编号：2593351