基于转录组测序技术对人宫颈癌Hela细胞阿霉素获得性耐药机制的研究

发布时间：2020-04-05 00:44

【摘要】：在全球范围内,宫颈癌的发病率仅低于乳腺癌,它在女性癌症中名列第二,极大地损害了女性的健康。目前化疗是宫颈癌最常见的治疗选择之一,特别是在中晚期宫颈癌的治疗中起着重要作用。作为一种高效的广谱抗癌药物,阿霉素独自或与联合其他抗肿瘤药物对宫颈癌的治疗有较好的效果,是一种较强力的化疗药物。而化疗过程中产生的阿霉素耐受现象是影响患者临床化疗治愈率的重要因素之一,但其分子机理还没有完全查明。因此本课题采用人宫颈癌Hela细胞以及体外构建的宫颈癌阿霉素耐药细胞Hela/Dox作为试验模型,利用转录组测序技术对宫颈癌Hela细胞及其相应的阿霉素耐药细胞Hela/Dox进行测序,从而得到两个转录本之间差异表达的基因,再结合GO、COG、KEGG三大数据库的注释结果以及相关文献,能够比较全面的获得该细胞中的基因功能及其结构,探寻与宫颈癌阿霉素获得性耐药相关的靶基因和信号通路,从而筛选出宫颈癌阿霉素耐药发生过程中的分子靶标。最后我们利用RNA干扰技术对分析所得的与宫颈癌阿霉素耐药相关的基因进行敲减,进一步证实该靶标对阿霉素获得性耐药中的作用。通过转录组测序共获得2562个差异基因,其中有1269个基因在Hela/Dox细胞样本中表达为上调,1293个基因在Hela/Dox细胞样本中表达为下调。并且KEGG的注释结果表明富集差异基因最多的通路有Pathways in cancer、P13K-Akt、MAPK、HTLV-1 infection pathway、Rap1、Proteoglycans in cancer等,推测这些信号途径可能参与人宫颈癌阿霉素耐药形成过程。我们选取基因表达差异倍数在前100的基因,将之对应在KEGG通路中,发现只有39个基因可以对应至相应的通路中,再查阅诸多文献的研究结果,发现WNT10B这个基因可能与人宫颈癌Hela细胞阿霉素耐药机制相关。因此我们选择WNT10B基因作为后续实验的主要研究对象,当利用干扰RNA敲减Hela/Dox细胞株中的Wnt10B基因后,Hela/Dox细胞对阿霉素的药敏性得到明显增强,敲除前后Hela/Dox细胞的耐药指数是1.37,对其耐药性有一定的缓解作用。以上结果表明,Wnt10B基因在控制Hela细胞阿霉素耐药过程中起着关键性作用,为宫颈癌的化疗耐药奠定了理论基础,同时也给宫颈癌的精准治疗提供了新的方向。
【图文】：

阿霉素,化学结构,空间构架,生长周期

图 1 阿霉素化学结构Figure 1 The chemical structure of doxorubicin作用机理如图 2 所示，它是通过嵌入细胞 DNA 的碱基对DNA 的空间构架，从而阻滞细胞中 DNA 的复制以及 DNA 所期性非特异性药物，可以在肿瘤细胞的各级生长周期发挥

阿霉素,机理,空间构架,生长周期

图 1 阿霉素化学结构Figure 1 The chemical structure of doxorubicin霉素的作用机理如图 2 所示，它是通过嵌入细胞 DNA 的碱基对中，破环 DNA 的空间构架，从而阻滞细胞中 DNA 的复制以及 DNA 所控制为周期性非特异性药物，可以在肿瘤细胞的各级生长周期发挥其毒
【学位授予单位】：西北大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R737.33

【参考文献】