IL-17A对卵巢癌网膜转移的影响及其机制的研究

发布时间：2020-04-05 07:28

【摘要】：目的:利用人、小鼠卵巢癌细胞株、卵巢癌病理标本和IL-17A敲除(Knock Out,KO,IL-17A-/-)小鼠系统地探讨外源性和内源性IL-17A(Interleukin-17A)对卵巢癌(ovarian cancer,OVCA)脂质代谢及腹腔网膜转移的影响及其作用机制,旨在为控制卵巢癌的网膜转移提供新的靶点和思路。方法:1.利用Western blotting技术检测不同浓度rh IL-17A处理不同时间对OVCAR3和A2780细胞脂肪酸代谢相关分子(FABP4,CD36,ATGL,MAGL,HSL,CPT1C)和细胞相关信号分子NF-КB和STAT3表达水平及其磷酸化水平表达的影响。同时应用Western Blotting技术检测NF-КB抑制剂PDTC和STAT3抑制剂STATTIC分别处理OVCAR3和A2780细胞2h后,rh IL-17A对OVCAR3和A2780细胞中脂肪酸结合蛋白FABP4和细胞相关信号分子NF-КB和STAT3表达水平及其磷酸化水平表达的影响。2.利用MTS细胞增殖实验检测rh IL-17A和/或脂肪酸(如棕榈酸PA)对OVCAR3和A2780细胞增殖的影响。并分别以STAT3抑制剂STATTIC、NF-КB抑制剂PDTC和FABP4抑制剂BMS309403进行相应的封闭实验。3.利用脂肪酸转运实验结合油红O染色定性和定量实验检测rh IL-17A和/或PA对OVCAR3和A2780细胞脂肪酸转运的影响。并分别以STAT3抑制剂STATTIC、NF-КB抑制剂PDTC以及FABP4抑制剂BMS309403进行相应的封闭实验。4.收集不同FIGO分期的上皮性卵巢癌OVCA(epithelial OVCA,EOC)临床病理标本,采用免疫组化法检测IL-17A和脂肪酸结合蛋白FABP4的表达,并分析IL-17A与FABP4及其与卵巢癌患者临床分期、转移和预后的相关性。5.利用C57BL/6野生型(wild type,WT)、IL-17A敲除小鼠和ID8细胞建立小鼠卵巢腹腔种植瘤动物模型,观察内源性IL-17A对小鼠卵巢腹腔内成瘤和转移的影响,并应用免疫组化法分析肿瘤组织中IL-17A和FABP4蛋白表达水平,应用Western Blotting技术分析内源性IL-17A对肿瘤组织中FABP4和细胞相关信号分子STAT3表达水平及其磷酸化水平的影响。6.酶联免疫吸附剂测定(ELISA)检测卵巢癌网膜富脂转移微环境(adipocyte-rich metastatic niche)中IL-17A的主要细胞来源。结果:1.Western blotting实验结果显示,rh IL-17A(10ng/ml,处理24h)可显著增加OVCAR3和A2780细胞中脂肪酸结合蛋白FABP4的表达水平和细胞相关信号分子NF-КB和STAT3的磷酸化水平(P0.05),然而对CD36,ATGL,MAGL,HSL和CPT1C蛋白表达无显著影响(P0.05);加入NF-КB抑制剂PDTC后,rh IL-17A对OVCAR3和A2780细胞中p-NF-КB蛋白表达的促进作用显著降低(P0.01),而对FABP4蛋白表达的促进作用无显著影响(P0.05);加入STAT3抑制剂STATTIC后,rh IL-17A对OVCAR3和A2780细胞中p-STAT3蛋白表达和FABP4蛋白表达的促进作用显著降低(P0.05)。2.MTS实验结果显示,单独rh IL-17A和单独PA作用均对OVCAR3和A2780细胞的增殖无显著影响(P0.05);同时加入rh IL-17A(10ng/ml)和PA(25μM)可显著促进OVCAR3和A2780细胞的增殖(P=0.006);STAT3抑制剂STATTIC和FABP4抑制剂BMS309403可抑制此促进作用(P0.05),NF-КB抑制剂PDTC对该促进效应没有显著影响(P0.05)。3.脂肪酸转运实验结合油红O染色定性和定量实验的结果显示,单独加入rh IL-17A和PA对OVCAR3和A2780细胞的脂肪酸转运无显著影响(P0.05),同时加入rh IL-17A(10ng/ml)和PA(25μM)可显著促进OVCAR3和A2780细胞的脂肪酸转运(P0.05)。STAT3抑制剂STATTIC和FABP4抑制剂BMS309403均可显著抑制rh IL-17A对OVCAR3和A2780细胞脂肪酸转运的促进作用(P0.05),然而NF-КB抑制剂PDTC对该促进效应无显著影响(P0.05)。4.卵巢癌临床病理组织标本分析表明,IL-17A和FABP4的表达与临床患者的卵巢癌临床分期(FIGO分期)、淋巴结转移和腹水转移等呈正相关(P0.01);IL-17A的表达强弱与FABP4的蛋白表达水平呈正相关(P0.01)。5.小鼠体内实验显示,内源性IL-17A可显著促进小鼠卵巢腹腔内成瘤(P=0.021)以及肿瘤组织中脂肪酸结合蛋白FABP4的表达水平(P=0.001)和细胞相关信号分子STAT3的磷酸化水平(P0.01)。WT小鼠卵巢癌组织中FABP4表达呈强阳性,IL-17-/-小鼠卵巢癌组织中FABP4表达均呈弱阳性,与WT小鼠组相比具有显著性差异(P=0.018)。6.ELISA结果显示,卵巢癌网膜富脂转移微环境中巨噬细胞和脂肪细胞均可分泌IL-17A。结论:本研究通过人卵巢癌细胞株体外实验、卵巢癌病理标本分析和动物体内实验进行研究,结果表明IL-17A可通过激活STAT3信号通路上调FABP4的表达,进而促进微环境中游离脂肪酸的摄取,为卵巢癌细胞的生长与增殖提供能量,从而促进卵巢癌网膜转移灶的生长。该研究提示IL-17A和FABP4可能成为改善卵巢癌转移的新靶点。
【图文】：

一、外源性 IL-17A 对卵巢癌网膜转移的天津医科大学硕士学位论文 的影响及机制研究蛋白表达均无显著性影响（P>0.05）。rhIL-17A 刺激 A2780 细胞 3h，6h，，12h，24h 可显著性提高 FABP4 与 p-NF-КB 蛋白表达（（P<0.01），刺激 A2780 细胞 1h，3h，6h，12h，24h 可显著性提高 p-STAT3 蛋白表达（（P<0.01），rhIL-17A刺激 OVCAR3 细胞 6h，12h，24h 可显著性提高 FABP4 蛋白表达（P<0.01），刺激 OVCAR3 细胞 1h，3h，6h，12h，24h 可显著性提高 p-NF-КB 蛋白表达（（P<0.01），刺激 OVCAR3 细胞 3h，6h，12h，24h 可显著性提高 p-STAT3蛋白表达（（P<0.01）。作用 6h 与 24h 蛋白增加更显著。表明 rhIL-17A 可促进脂肪酸结合蛋白 FABP4 的表达以及细胞相关信号分子 STAT3 与 NF-КB 磷酸化水平，但对脂质代谢相关分子无显著性影响，为我们进一步探究 rhIL-17A促进卵巢癌网膜转移的机制提供理论依据。

一、外源性 IL-17A 对卵巢癌网膜转津医科大学硕士学位论文 的影响及机制研究hIL-17A（10ng/ml）处理人卵巢癌细胞系不同时间对脂肪酸代谢相关蛋白表达和细信号通路表达水平的影响。该实验重复 3 次。.2.2 rhIL-17A 不能通过 NF-КB 信号通路促进 FABP4 蛋白表达本次实验我们进行了 rhIL-17A 促进 FABP4 蛋白的表达的机制研究，用 MTS 实验检测了 NF-КB 信号分子 705 位点 Tyr 磷酸化（p-NF-КB p制剂 PDTC 对卵巢癌细胞系 OVCAR3 和 A2780 的 IC50，结果表明（图DTC 处理人卵巢癌细胞系 OVCAR3 和 A2780 24h 后，IC50 分别为 3.499.538μM。综合考虑 PDTC 作用 OVCAR3 和 A2780 后，细胞存活率状况合细胞 IC50，我们选取 0.3125μM 处理 A2780，1.25μM 处理 OVCAR3 24h。
【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R737.31

【相似文献】

相关期刊论文 前10条

1 陆许贞;吴云辉;;糖皮质激素对药物性肝损害患者血清中IL-17A水平的影响[J];浙江医学;2017年06期

2 钟芳芳;袁霞;周太光;邹艳;刘文君;;IL-17A基因启动子区多态性与川崎病易感性的相关性研究[J];泸州医学院学报;2016年01期

3 程溪;王沙沙;刘宇宏;沈凌汛;;IL-17A对硝普钠诱导的类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞凋亡的保护作用及机制研究[J];中国免疫学杂志;2013年12期

4 马菲菲;车向前;林育红;;铜绿假单胞菌肺部感染小鼠模型中IL-17A的表达研究[J];中国微生态学杂志;2014年12期

5 王发选;杨婷;张洋;黄程君;崔鹂;兰亚佳;张勤;;矽肺模型大鼠肺组织中IL-17A的表达[J];工业卫生与职业病;2013年06期

6 宋桂芹;刘康;梁素华;刘云;曾梅;申跃武;王婉;;自身免疫性肝炎肺组织中IL-17A及24p3表达的研究[J];西部医学;2010年04期

7 王志旺;蔺兴遥;任远;李荣科;刘雪枫;程小丽;王瑞琼;妥海燕;;当归精油对哮喘模型大鼠的平喘作用及其对IL-10、IL-17A的影响[J];中药药理与临床;2015年03期

8 韩春;陈复兴;吕小婷;刘军权;费素娟;;结直肠癌患者外周血Vδ2 T细胞IL-17A的表达研究1[J];中国免疫学杂志;2015年07期

9 郭盛;张建华;吴良霞;陈凌;郝春莉;范小勇;;重组IL-17A耻垢分枝杆菌的构建及其对巨噬细胞表达炎症因子的影响[J];中国生物制品学杂志;2012年11期

10 刘虹;李辙;吕晓希;米粟;;中和IL-17A活性改善肺纤维化小鼠肺功能[J];航天医学与医学工程;2013年01期

相关会议论文 前10条

1 委奥运;岳丹;;银屑病病变形成机制中IL-17A作用的研究[A];第七届中国临床微生物学大会暨微生物学与免疫学论坛论文汇编[C];2016年

2 孟粹达;安立峰;姜晓丹;朱冬冬;董震;李琳;孔红;;IL-17A与喉鳞状细胞癌的相关性研究[A];吉林省医学会第九次耳鼻咽喉—头颈外科学术会议论文汇编[C];2011年

3 王慧娟;王慧;张璐;杨晓帆;孙彬;周洪;季晓辉;;IL-17A基因敲除导致肾间质纤维化加速的分子机制[A];第九届全国免疫学学术大会论文集[C];2014年

4 王浩;李巧霞;单保恩;;IL-17A和IL-17F差异性表达在胃癌发生中的作用及其意义[A];第九届全国免疫学学术大会论文集[C];2014年

5 闫妮;杨婧;秦秋;Madhu;朱远风;李翠;杨香菊;张进安;;IL-17A和IL-17F基因多态性与自身免疫性甲状腺病的相关性[A];中华医学会第十次全国内分泌学学术会议论文汇编[C];2011年

6 牛秀珑;段红洁;刘文星;张宏健;徐灵灵;姚智;邓为民;;IL-17A与卵巢癌的网膜转移正相关[A];第十一届全国免疫学学术大会摘要汇编[C];2016年

7 张蕾;张云飞;马立平;胡春梅;胡艳欣;汪明;;鸡IL-17A在球虫感染过程中的作用[A];中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第六次代表大会暨第十一次学术研讨会论文集[C];2011年

8 钟芳芳;蒋利萍;张璐颖;刘玮;田雯;唐雪梅;;重庆地区汉族儿童IL-17A基因启动子区-197G/A多态性与川崎病[A];中华医学会第十七次全国儿科学术大会论文汇编（上册）[C];2012年

9 陈佳宁;章旭君;林臣鸿;刁宏燕;;NKT细胞产生IL-17A促进原发性胆汁性胆管炎的纤维化进程[A];第十三届全国免疫学学术大会摘要汇编[C];2018年

10 徐灵灵;李稚君;邓为民;;IL-17A促进肿瘤转移的机制研究[A];第十一届全国免疫学学术大会摘要汇编[C];2016年

相关博士学位论文 前10条

1 汪峻岭;IL-17A在糖尿病视网膜病变发病机理中的研究[D];南京医科大学;2018年

2 谭忠明;IL-17A在肝脏缺血再灌注损伤及肝硬化发生中的作用机制研究[D];南京医科大学;2014年

3 谢朝辉;IL-17A在结肠炎相关结直肠癌变中的作用与机制研究[D];河北医科大学;2016年

4 姜丁源;IL-17A在结节病发病机制中作用研究及痤疮丙酸杆菌诱导小鼠结节病肺纤维化[D];首都医科大学;2016年

5 车鸾卿;气道炎症性疾病中炎症小体调控IL-17A~+γδT细胞/中性粒细胞的分子机制研究[D];浙江大学;2015年

6 周素锋;IL-17A促进梗死后心室重构及其机制的研究[D];华中科技大学;2014年

7 张建成;星形胶质细胞来源的IL-17A对缺血性脑卒中神经再生和功能恢复的影响及机制研究[D];华中科技大学;2015年

8 邢晓婧;IL-17A在系统性硬皮病患者血管病变发病中作用机制的研究[D];复旦大学;2014年

9 王宝中;IL-17A在放射性肺损伤中的表达及其作用的研究[D];山东大学;2014年

10 赵洁;IL-17A在小鼠肝脏缺血再灌注损伤模型中促进肝脏修复的作用与机制研究[D];南京医科大学;2016年

相关硕士学位论文 前10条

1 徐灵灵;IL-17A对卵巢癌网膜转移的影响及其机制的研究[D];天津医科大学;2018年

2 毛其芬;手足口病患儿外周血IL-17A~+T细胞和相关细胞因子检测及意义[D];浙江大学;2016年

3 崔巍;肺腺癌患者外周血IL-17A~+T细胞和相关细胞因子检测及意义[D];浙江大学;2015年

4 王聪聪;自体组织包埋治疗对寻常型银屑病患者血清中IL-17A、VEGF表达的影响[D];天津医科大学;2015年

5 吴丹;IL-17A在口腔黏膜下纤维化中的表达及丹玄口康干预作用研究[D];湖南中医药大学;2016年

6 张璐;IL-17A在肾小管间质纤维化中作用的初步研究[D];南京医科大学;2012年

7 罗俊;细胞因子IL-17A在牙根吸收过程中表达的实验研究[D];南昌大学;2012年

8 黄舒柠;IL-17A对系统性硬化病小鼠模型皮肤和肺部纤维化病变的作用[D];广西医科大学;2017年

9 马艳梅;IL-17A对肺纤维化大鼠肺组织炎症的调控研究[D];泸州医学院;2013年

10 赖文盈;IL-17A基因敲除对病毒性心肌炎小鼠抗心肌抗体的影响[D];广西医科大学;2014年

本文编号：2614731