双氢青蒿素用于宫颈病变防治机制的研究

发布时间：2020-04-05 10:37

【摘要】：目的:子宫颈癌是全球第四常见的女性恶性肿瘤,是全球一项重大的健康挑战。2015年统计调查发现,低收入和中等收入国家中约有27万例宫颈癌患者死亡,这些国家的死亡率是发达国家的18倍。尽管近年来宫颈癌筛查的覆盖面在不断扩大,治疗手段也随着技术革新在进步。但是对于HPV感染、宫颈癌前病变及宫颈癌的诊断的准确性和治疗的有效性仍存在较大的个体差异及局限性。青蒿素(Artemisinin,ARS)一直作为有效的抗疟药物为人们所熟知,研究表明其在抗癌、抗病毒、抗寄生虫、抗真菌、过敏性炎症、特异性炎症、感染性炎症以及白血病治疗均有显著效果。因此本研究拟从双氢青蒿素的抗肿瘤的特性出发,明确其对宫颈癌细胞的作用及其机制。方法:1.收集宫颈炎症组织,低级别鳞状上皮内病变(Low-grade squamous intraepithelial lesion,LSIL)、高级别鳞状上皮内病变(High-grade squamous intraepithelial lesion,HSIL)、宫颈鳞状细胞癌(Cervical squamous cell carcinoma)组织共172例。使用免疫组化方法检测不同级别宫颈病变组织中ki67、p16表达水平。2.使用宫颈癌HeLa细胞系作为宫颈癌细胞离体模型,CCK-8利用细胞活性和细胞毒性检测试剂盒(Cell Counting Kit-8,CCK-8)测定离体水平双氢青蒿素(dihydroartemisinin,DHA)作用宫颈癌细胞的50%抑制浓度(Half maximal inhibitory concentration,IC50值),及药物对宫颈癌细胞的增值能力的影响。使用western blot检测细胞中凋亡相关蛋白及迁徙相关蛋白的表达水平;使用细胞划痕实验检检测双氢青蒿素对于宫颈癌细胞迁移能力的影响。通过western blot检测药物处理后HeLa细胞中ki67、p16的表达情况,探究青蒿素是否同时具有抵抗HPV病毒基因引起的宫颈细胞恶性增殖的药物作用。结果:1.ki67、p16在不同宫颈组织中的阳性表达率如下:其中炎症组p16的阳性表达率为11.11%(4/36),低级别宫颈上皮内瘤变组的阳性表达率为60.00%(30/50),高级别宫颈上皮内瘤变组的阳性表达率为94.34(50/53),宫颈癌组阳性表达率为100.00%(33/33)。其中炎症组ki67的阳性表达率为30.56%(11/36),低级别宫颈上皮内瘤变组的阳性表达率为56.00%(28/50),高级别宫颈上皮内瘤变组的阳性表达率为94.34(50/53),宫颈癌组阳性表达率为100.00%(33/33)。不同级别宫颈病变组织中的p16、ki67的阳性表达率进行比较(χ_1~2=87.474,P_10.001;χ_2~2=61.477,P_20.001),不同宫颈组织中p16、ki67的表达率差异有统计学意义。P16、ki67的阳性表达率与宫颈组织病变等级呈正相关。2.双氢青蒿素对HeLa细胞的药物作用主要以下几个方面:(1)CCK-8细胞增殖活力实验结果提示青蒿素对宫颈癌细胞增殖呈时间和浓度依赖性抑制作用。经计算测得青蒿素对于HeLa细胞的IC50值为22.86±3.765umol/l。(2)可通过线粒体及内质网途径促进HeLa细胞的凋亡。其中线粒体途径中促凋亡蛋白clever-Caspase3、clever-Caspase9、clever-Caspase12表达量均上升,抑制凋亡蛋白Bcl-2、Bcl-xl表达下降。内质网应激途径中相关蛋白Chop表达量增多。(3)细胞划痕实验表明DHA抑制宫颈癌细胞的迁徙。双氢青蒿素处理后,HeLa细胞中E-钙粘蛋白表达量增加。(4)青蒿素可能存在抵抗HPV感染引起的细胞恶性增殖的作用。检测药物处理36小时后HeLa中ki67蛋白表达明显减少,p16蛋白的表达增加。结论:双氢青蒿素对宫颈癌的发生发展具有一定的抑制作用,有着广阔的临床应用前景,可作为未来宫颈癌新型防治武器。
【图文】：

图①为正常对照组 HeLa 细胞放大 100 倍显微镜下图像，图②为图①中方框区域放大图像。图③为实验组 20umol/L 的 DHA 处理 24 小时后 HeLa 细胞放大 100 倍显微镜下图像，图④为图③中方框区域放大图像。图 B
【学位授予单位】：皖南医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R737.33

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本文编号：2614907