DPP8对宫颈癌细胞生物学行为的影响及相关机制

发布时间：2020-04-11 22:25

【摘要】：目的:检测二肽基肽酶8(DPP8)在宫颈癌组织和细胞中的表达,评估DPP8蛋白表达水平与宫颈癌患者临床病理特征之间的关系,研究DPP8对宫颈癌细胞生物学行为的影响及其可能的机制。方法:采用免疫组织化学的方法检测宫颈癌组织中DPP8蛋白表达水平,评估DPP8蛋白表达水平与宫颈癌患者临床病理特征之间的关系。采用Western Blot和Real Time PCR方法检测两种宫颈癌细胞系和一种宫颈正常永生化细胞系中DPP8蛋白和mRNA表达水平。采用靶向DPP8基因的siRNA下调HeLa和SiHa细胞中DPP8基因的表达。采用靶向DPP8基因的pcDNA3.1-Flag上调HeLa和SiHa细胞中DPP8基因的表达。EDU测定HeLa和SiHa细胞增殖率。流式细胞PI单染法检测HeLa和SiHa细胞各个增殖时期细胞比例的变化。流式细胞Annexin V-FITC/PI双染法检测HeLa和SiHa细胞各个凋亡时期细胞比例的变化。Transwell小室法检测HeLa和SiHa细胞侵袭和迁移能力的改变。同时,Westem Blot和Real Time PCR方法检测Cyclin D1、BAX、Bcl-2、MMP2、MMP9的蛋白和mRNA的表达情况。结果:与正常宫颈组织相比,宫颈癌组织中的DPP8蛋白表达明显增加。DPP8蛋白表达水平与宫颈癌患者的年龄、临床病理分型无明显相关性(P0.05),但是DPP8蛋白表达水平与宫颈癌患者组织病理分级、FIGO分期、淋巴结转移有显著相关性(P0.05)。下调DPP8表达后,HeLa和SiHa细胞的增殖能力减弱。下调DPP8表达后,处于增殖时期的HeLa和SiHa细胞比例明显减少,处于G1期的HeLa和SiHa细胞比例明显增多,处于S期和G2期的HeLa和SiHa细胞比例明显减少,处于早期凋亡时期的HeLa和SiHa细胞比例明显增多,侵袭和迁移到Transwell小室滤膜底层的HeLa和SiHa细胞数目显著减少(P0.05)。上调DPP8表达时,处于增殖时期的SiHa细胞比例明显增多,处于G1期的HeLa和SiHa细胞比例明显减少,处于S期和G2期的HeLa和SiHa细胞比例明显增加,侵袭和迁移到Transwell小室滤膜底层的HeLa和SiHa细胞数目明显增多(P0.05)。DPP8 还能调控 HeLa 和 SiHa细胞中 CyclinD1、Bc1-2、Bax、MMP2、MMP9的表达。DPP8表达下调时,CyclinD1、BAX、MMP2、MMP9蛋白和mRNA的表达量降低,BCL-2蛋白和mRNA表达量增高(P0.05)。DPP8上调时CyclinD1、BAX、MMP2、MMP9蛋白和mRNA表达明显升高,BCL-2蛋白和mRNA表达量减少(P0.05)。结论:与正常宫颈组织相比,DPP8蛋白在宫颈癌组织中表达增加,与宫颈D1、Bc1-2、BAX、MMP2、MMP9的表达促进宫颈癌细胞增殖、迁移、侵袭,抑制宫颈癌细胞凋亡。实验结果为DPP8作为宫颈癌治疗靶点提供了新的依据。
【图文】：

癌细胞系（ＨｅＬａ）、宫颈上皮永生化细胞系（Ｈ８）中的表达水平。结果显示，与逡逑正常宫颈永生化细胞Ｈ８相比，在ＳｉＨａ和ＨｅＬａ细胞中ＤＰＰ８表达量较高，差异均逡逑有统计学意义（；？＜０．０５）。（见图２）逡逑２－°１逦g逡逑ＨｅＬａ逦ＳｉＨａ逦Ｈ８逦｜邋１５＇逦ｔ逡逑ｏｐｐｓ邋ｍ邋ｒｎｍ邋ｍｍ逦Ｉ－邋■邋■邋ｍ逡逑ｓａｐｄｈ逦°0邋ｓ＇邋Ｗ逡逑图２宫颈癌细胞系中ＤＰＰ８蛋白及ｍＲＮＡ表达水平逡逑２．３瞬时转染ｓｉＲＮＡ后ＤＰＰ８的表达逡逑２．３．１测定转染不同ｓｉＲＮＡ后ＤＰＰ８蛋白及ｍＲＮＡ的表达水平逡逑分别用邋ｓｉＲＮＡ－ＮＣ、ｓｉＲＮＡ－ＤＰＰ８邋１、ｓｉＲＮＡ－ＤＰＰ８邋２、ｓｉＲＮＡ－ＤＰＰ８邋３、逡逑ｓｉＲＮＡ－ＤＰＰ８邋４转染ＳｉＨａ和ＨｅＬａ细胞

转染后SiHa细胞和HeLe细胞中DPPB蛋白的袅达
【学位授予单位】：武汉大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R737.33

【参考文献】

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1 Sumaiya Chowdhury;Yiqian Chen;Tsun-Wen Yao;Katerina Ajami;Xin M Wang;Yury Popov;Detlef Schuppan;Patrick Bertolino;Geoffrey W McCaughan;Denise MT Yu;Mark D Gorrell;;Regulation of dipeptidyl peptidase 8 and 9 expression in activated lymphocytes and injured liver[J];World Journal of Gastroenterology;2013年19期

2 ;Expression of a novel dipeptidyl peptidase 8(DPP8)transcript variant,DPP8-v3,in human testis[J];Asian Journal of Andrology;2005年03期

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本文编号：2623912