PPCNg介导人羊膜间充质干细胞治疗宫腔粘连的研究

发布时间：2020-04-25 16:10

【摘要】：目的:探讨人羊膜间充质干细胞(human amniotic mesenchymal stem cells,hAMSCs)联合PPCNg聚合物(polyethylene glycol citrate-co-N-isopropylacrylamide gelatin,PPCNg)在宫腔粘连(intrauterine adhesions,IUA)治疗中的有效性和可行性。方法:将PKH26标记的hAMSCs在不同浓度PPCNg中培养,48小时后荧光显微镜下察看细胞形态,CCK-8法进行细胞增殖和毒性分析,评价PPCNg的材料毒性。雌性SD级大鼠随机分为假手术组、单纯IUA模型组(模型组)、PPCNg治疗IUA组(PPCNg组)、hAMSCs治疗IUA组(hAMSCs组)及PPCNg联合hAMSCs治疗IUA组(PPCNg+hAMSCs组)。建立IUA模型2周后,假手术组不处理,其余建模的各组分别宫腔内注射PBS、PPCNg、hAMSCs的PBS悬液及hAMSCs的PPCNg悬液。宫腔注射2周后,子宫组织石蜡包埋、切片,通过HE染色和Masson染色检测子宫内膜腺体及纤维化状况,免疫组化检测子宫内膜中TGF-β1、VEGF、VIM、α-SMA、CK19及E-Ca染色情况;冰冻切片荧光显微镜下观察子宫内膜中hAMSCs分布状况。结果:(1)hAMSCs在PPCNg(浓度依次为0.625%PPCNg、1.25%PPCNg、2.5%PPCNg、5%PPCNg、10%PPCNg)中贴壁成长,状态良好;(2)CCK-8法检测实验组(0.625%PPCNg、1.25%PPCNg、2.5%PPCNg、5%PPCNg、10%PPCNg)和阴性对照组的OD值,差异无统计学意义,材料毒性的分级为1级(合格);(3)与假手术组相比,模型组腺体数目下降(P=0.000),纤维化面积比增高(P=0.000);与模型组相比,PPCNg组、hAMSCs组及PPCNg+hAMSCs组的腺体数目不同程度增多(P=0.000),纤维化面积比不同程度减少;(4)与模型组相比,PPCNg组、hAMSCs组及PPCNg+hAMSCs组TGF-β1、VEGF、VIM及α-SMA的表达均不同程度降低,其中PPCNg+hAMSCs组明显降低(P=0.000),而CK19及E-Ca表达则不同程度升高,其中PPCNg+hAMSCs组明显升高(P=0.000);(5)PPCNg+hAMSCs组PKH26标记的hAMSCs远远多于hAMSCs组。结论:hAMSCs在PPCNg中生长良好,PPCNg无细胞毒性,可联合hAMSCs治疗IUA。PPCNg与hAMSCs联用,有助于hAMSCs定植于子宫,减少hAMSCs流失,优于单用hAMSCs,能更好的改善宫腔纤维化,增强子宫内膜修复,防治再粘连,从而提升hAMSCs治疗IUA的有效性。
【图文】：

图 1 荧光显微镜下各组细胞的形态（200X）re 1 Cell morphology of each group under fluorescence microscope（200X）g 细胞毒性检测

重庆医科大学硕士研究生学位论文 hAMSCs 在大鼠子宫内膜中的分布情况见PKH26标记的hAMSCs的细胞膜呈红色荧光，，所有被DAPI荧光。hAMSCs 组及 PPCNg+hAMSCs 组呈蓝色及红色荧光。光分布明显少于 PPCNg+hAMSCs 组（见图 2）。hAMSCs组 PPCNg+hAMSCs组
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R711.74

【参考文献】

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本文编号：2640429