miR-27a靶向调控SIPA1L3在宫颈癌发生中的作用及其相关机制的初步研究

发布时间：2020-04-27 08:03

【摘要】：目的:在宫颈癌的发生、发展中,微小RNA(micro RNA,mi RNA)的异常表达起着重要作用。课题组前期使用Affymetrix Gene Chip mi RNA 4.0 Array芯片技术检测了仅感染了HPV16的不同阶段的宫颈组织中mi RNA的表达谱,结果显示mi R-27a的表达随着宫颈病变程度的进展而呈现上升的趋势。为验证前期课题组芯片检测结果,本研究对不同病变程度的宫颈组织中mi R-27a的表达水平进行检测验证,并通过过表达及低表达mi R-27a,研究mi R-27a对宫颈癌Siha细胞的增殖及凋亡等生物学功能的影响,同时探讨mi R-27a对下游靶基因的调控作用,进而阐明mi R-27a在宫颈癌的发生与发展过程中的可能分子机制。方法:(1)对仅HPV16阳性的正常宫颈组织、仅HPV16阳性的HSIL组织以及仅HPV16阳性的早期宫颈鳞癌组织中的mi R-27a的表达量使用RT-PCR方法分别进行检测验证;(2)使用Lipofectamine?3000转染试剂将mi R-27a mimic、mi R-27a mimic NC、mi R-27ainhibitor、mi R-27a inhibitor NC以及NC片段转染入宫颈癌细胞Siha中,使用RT-PCR实验技术验证mi R-27a过表达及低表达转染后的mi R-27a的表达水平;(3)增殖及凋亡实验检测mi R-27a过表达及低表达对Siha宫颈癌细胞的增殖、凋亡等生物学功能的影响;(4)使用Western-blot实验技术检测Siha细胞转染之后下游靶基因SIPA1L3的表达水平。结果:(1)在HPV16阳性的正常宫颈组织、HSIL组织以及早期宫颈鳞癌组织中,mi R-27a的相对表达量分别为:1.10±0.06、1.58±0.07、1.94±0.08,任意两组之间相比较,差异均有统计学意义(P0.05);(2)Siha细胞转染完成之后,mi R-27a mimic组中mi R-27a的表达水平增加至其NC对照组的7.42倍,细胞增殖能力较前明显增强,而细胞凋亡则明显下降,SIPA1L3蛋白的相对表达量降为其NC对照组的18.13%,与其NC对照组相比,差异有统计学意义(P0.05);相反,转染mi R-27a inhibitor使mi R-27a的表达水平降低至其NC对照组的20.59%,细胞增殖能力较前明显下降,而细胞凋亡则明显上升,SIPA1L3蛋白的相对表达量增加为其NC对照组的2.43倍,与其NC对照组相比,差异具有统计学意义(P0.05)。本研究的空白对照组与mi R-27a mimic NC组与mi R-27ainhibitor NC组之间相比,差异均无统计学意义(P0.05)。结论:mi R-27a通过下调SIPA1L3基因进而促进宫颈癌细胞增殖、抑制其凋亡,从而起到了一定程度的促癌作用,为阻断宫颈上皮内瘤变(CIN)进展为宫颈癌提供了新的思路。
【图文】：

细胞转染,荧光显微镜,光镜,转染

图 2-2Siha 细胞转染后 24h（200×）光镜(A)及荧光显微镜(B)下所见.3 miR-27a 的表达量测定转染了 miR-27a mimic 组中 miR-27a 的表达量相比其 NC 对照组明显增高(P<0.05)，为其C 对照组的 7.42 倍。转染了 miR-27a inhibitor 组中 miR-27a 的表达量相比其 NC 对照组明显降(P<0.05)，表达水平为其 NC 对照组的 20.59%。但 miR-27a 的表达量在 miR-27a mimic NC、iR-27a inhibitor NC 及空白对照组三组之间的差异，，相比无统计学意义（P＞0.05）。提示：染 miR-27a mimic 可促进 miR-27a 在 Siha 细胞中的表达，相反，转染 miR-27a inhibitor 可制 miR-27a 在 Siha 细胞中的表达（表 2-1）。表 2-1 转染后 Siha 细胞中 miR-27a 的相对表达量(xs )组别 miR-27a 的相对表达量miR-27a mimic 组 9.35±0.30
【学位授予单位】：山西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R737.33

【参考文献】