低评分胚胎的非整倍体分析

发布时间：2020-05-03 19:06

【摘要】：目的应用荧光原位杂交技术(FISH)分析低形态学评分胚胎的染色体非整倍体情况并探讨低评分胚胎作为移植选择的安全性。方法收集IVF/ICSI周期中的D3低评分胚胎,卵裂球固定后,应用8种不同的染色体探针进行二轮FISH杂交检测细胞核。结果收集D3低评分胚胎40枚,获得178个卵裂球,成功固定核170个,固定成功率为95.5%(170/178);FISH杂交后163个核信号完整,杂交成功率为95.9%(163/170);40枚2PN胚胎中,未发现异常胚胎12枚,占30%,异常胚胎28枚,占70%。结论低评分胚胎染色体异常率高,临床应用于移植或冷冻时建议结合PGS。
【图文】：

破裂图,胚胎

巧细遣Ｆ嗑?5min后在荧光显微镜下观察并记录结果。分析结束后，将玻片至于75%酒精中，脱去盖玻片，再依次放入70%、90%和100%的酒精中脱水各2min，室温晾干玻片。加入第二轮杂交探针混合液，重复上述杂交过程，加3μlDAPI负染，盖上盖玻片，15min后分析观察结果。1.6结果判定以染色体核型正常男性为对照，计数淋巴细胞间期核以判断FISH杂交效率。信号判读标准[3]：两个同色信号间距小于信号大小的一半时，判断为一个信号。2结果2.1单卵裂球固定效率共收集40枚胚胎，共获得178个卵裂球。成功固定核170个（图1、2），固定成功率为95.5%（170/178）。2.2FISH杂交率以正常男性淋巴细胞FISH杂交结果为对照，计数200个细胞。196个细胞信号完整，杂交成功率为98.0%（196/200）（图3、4）。对170个成功固定的核进行两轮FISH杂交检测8种染色体（图5、6），163个核信号完整，杂交成功率为95.9%（163/170）。2.3FISH结果40个2PN胚胎中，正常胚胎12个，占30%。异常胚胎28个，占70%；其中非嵌合型异常10个，占25%；嵌合型异常14个，，占35%；无规律分离型4个，占10%。结果见附表。附表40枚低评分胚胎的FISH结果图1固定过程中胞膜破裂图片（×200）第12期史秋雯，等：低评分胚胎的非整倍体分析·17·

影响图,细胞核,探针

芯?中，应用8条染色体探针对40枚D3低评分胚胎进行分析，12枚为染色体正常胚胎，正常率为30%；28枚为染色体异常胚胎，异常率为70%。许多研究表明，嵌合体现象在人类早期胚胎中普遍存在，但各文献中报道的嵌合体率差异较大，因此，嵌合体的影响尚有争议。HARPER等[7]对多中心的结果分析后报道嵌合体的发生率在11%~52%。这种差异的形成受多种因素的影响：①胚胎操作及培养时的温度改变、氧浓度；②超排卵方案；③女方年龄；④胚胎的发育速度及形态；⑤选用的FISH检测探针数。其中超排卵方案和胚胎培养体系的影响图2固定后细胞核（×200）红色为13号染色体探针信号；天蓝色为16号染色体探针信号；蓝色为18号染色体探针信号；绿色为21号染色体探针信号；黄色为22号染色体探针信号图3淋巴细胞中期核PB探针杂交后信号（×2000）红色为X染色体探针信号，天蓝色为17号染色体探针信号,绿色为Y染色体探针信号，蓝色为DAPI染色图4淋巴细胞中期核混合探针2杂交信号（×2000）红色为13号染色体探针信号；天蓝色为16号染色体探针信号；蓝色为18号染色体探针信号；绿色为21号染色体探针信号；黄色为22号染色体探针信号图5卵裂球PB探针杂交后二倍体信号（×2000）红色为X染色体探针信号；天蓝色为17号染色体探针信号；绿色为Y染色体探针信号；蓝色为DAPI染色图6卵裂球17，X，Y染色体探针杂交后，XXY（×2000）中国现代医学杂志第25卷·18·

【共引文献】