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miRNA-101通过调控胎盘滋养细胞功能参与妊娠期糖尿病的发病

发布时间:2020-05-08 19:18
【摘要】:目的:研究miRNA-101对胎盘滋养细胞(HTR-8/SVneo)增殖和迁移能力的影响,探讨其在妊娠期糖尿病(GDM)中的可能作用机制。方法:收集GDM患者及正常孕妇胎盘组织,PCR、Western blot法检测胎盘组织中miR-101及下游因子EZH2表达,免疫组化法检测胎盘中EZH2及其下游因子H3K27me3的定位及表达。分别上调和抑制HTR-8/SVneo细胞中miRNA-101表达,PCR法检测EZH2 mRNA表达水平,Western blot法检测EZH2及H3K27me3蛋白表达,CCK-8法、Transwell实验检测细胞增殖和迁移能力。结果:GDM组胎盘组织中miR-101 mRNA表达明显高于正常组(P0.05),EZH2及H3K27me3表达显著低于对照组(P0.05)。上调miRNA-101后,HTR-8/SVneo细胞中EZH2及H3K27me3表达显著降低(P0.05),细胞增殖能力显著降低(P0.01),迁移能力明显降低(P0.05);抑制miR-101表达后,EZH2及H3K27me3表达显著升高(P0.05),细胞增殖能力无明显变化(P0.05),迁移能力显著增强(P0.001)。结论:GDM患者胎盘中miRNA-101表达异常升高,miRNA-101可能通过EZH2-H3K27me3途径使胎盘滋养细胞增殖及迁移能力降低,参与GDM发病的病理机制。
【图文】:

孕妇,免疫组化,统计学意义,蛋白


。P<0.05为差异有统计学意义。2结果2.1胎盘组织免疫组化EZH2蛋白和H3K27me3蛋白在正常孕妇及GDM孕妇胎盘滋养细胞中均有表达,见图1。GDM孕妇胎盘滋养细胞中EZH2蛋白和H3K27me3蛋白均低于正常孕妇,差异有统计学意义(P<0.05),见图2。2.2胎盘组织中miR-101及EZH2mRNA表达PCR结果显示,miR-101在GDM孕妇胎盘组织中的表达显著高于正常妊娠孕妇(P<0.05),EZH2在GDM孕妇胎盘组织中的表达显著低于正常孕妇(P<0.05),见图3。图1胎盘组织免疫组化(×200)A:正常孕妇胎盘滋养细胞中EZH2阳性表达;B:GDM孕妇胎盘滋养细胞中EZH2阳性表达;C:正常孕妇胎盘滋养细胞中H3K27me3阳性表达;D:GDM孕妇胎盘滋养细胞中H3K27me3阳性表达图2半定量分析结果*P<0.05图3胎盘组织中miR-101、EZH2mRNA表达*P<0.052.3胎盘组织中EZH2及H3K27me3蛋白表达Westernblot结果显示,GDM孕妇胎盘组织中EZH2、H3K27me3表达均低于正常孕妇,差异均有统计学意义(P<0.05),见图4。图4正常孕妇及GDM孕妇胎盘组织中EZH2及H3K27me3蛋白表达*P<0.052.4转染miR-101mimics和inhibitor后细胞中miR-101及EZH2mRNA表达Real-timePCR结果显示,转染miR-101mimics组中miR-101表达水平高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)(图5A);转染miR-101inhibitor组中miR-101表达水平低于对照组,差异有统计学意义(P<0.01)(图5B),,表明miR-101mimics及inhibitor可模拟细胞内源性miR-101mRNA水

半定量分析,孕妇,统计学意义


差异有统计学意义(P<0.05),见图2。2.2胎盘组织中miR-101及EZH2mRNA表达PCR结果显示,miR-101在GDM孕妇胎盘组织中的表达显著高于正常妊娠孕妇(P<0.05),EZH2在GDM孕妇胎盘组织中的表达显著低于正常孕妇(P<0.05),见图3。图1胎盘组织免疫组化(×200)A:正常孕妇胎盘滋养细胞中EZH2阳性表达;B:GDM孕妇胎盘滋养细胞中EZH2阳性表达;C:正常孕妇胎盘滋养细胞中H3K27me3阳性表达;D:GDM孕妇胎盘滋养细胞中H3K27me3阳性表达图2半定量分析结果*P<0.05图3胎盘组织中miR-101、EZH2mRNA表达*P<0.052.3胎盘组织中EZH2及H3K27me3蛋白表达Westernblot结果显示,GDM孕妇胎盘组织中EZH2、H3K27me3表达均低于正常孕妇,差异均有统计学意义(P<0.05),见图4。图4正常孕妇及GDM孕妇胎盘组织中EZH2及H3K27me3蛋白表达*P<0.052.4转染miR-101mimics和inhibitor后细胞中miR-101及EZH2mRNA表达Real-timePCR结果显示,转染miR-101mimics组中miR-101表达水平高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)(图5A);转染miR-101inhibitor组中miR-101表达水平低于对照组,差异有统计学意义(P<0.01)(图5B),表明miR-101mimics及inhibitor可模拟细胞内源性miR-101mRNA水平。miR-101mimics组中EZH2表达水平低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)(图5C);转染miR-101inhibitor组EZH2表达水平高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)(图5D),表明HTR-8/SVneo细胞过表达m

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