ApoE缺失通过激活细胞与基质粘附中的FAK-ERK信号通路促进卵巢癌的恶性进展

发布时间：2020-05-12 11:49

【摘要】：背景卵巢癌是常见的的妇科恶性肿瘤之一,是一种致死率高、严重危害妇女健康的疾病。其主要转移途径是腹腔种植转移,这个过程是影响预后的重要因素,也是研究卵巢癌细胞侵袭转移的关键所在。载脂蛋白E(Apolipoprotein E,ApoE)是血浆脂蛋白的重要组成部分,参与多种细胞的生长调控。在卵巢癌患者的血清、原发肿瘤和转移中均可检测到ApoE的过表达。有研究表明ApoE缺失可以导致细胞外基质分泌和表达增高,影响腹腔内微环境变化。然而目前尚无研究揭示ApoE缺失与卵巢癌进展的相关机制。目的研究ApoE缺失介导的腹腔细胞外基质重塑,以及这个过程影响卵巢癌恶性进展的具体机制。方法1.收集9例卵巢癌患者配对原发灶与转移灶的组织标本,通过HE染色法、Masson染色和和天狼星红染色法检测组织标本中的胶原纤维表达水平。2.使用ApoE缺失的小鼠以及WT小鼠作为动物模型,q-PCR以及Western blot技术检测其横膈膜和大网膜的ECM成分。将ID8细胞种植至ApoE-/-小鼠与WT小鼠腹腔中获得获得同种异体移植模型,使用活体生物荧光成像方法监测其肿瘤进展。通过Masson染色法分析肿瘤组织中的胶原含量。使用免疫组化的方法检测肿瘤组织中MMP-10、MMP-9以及ERK的表达。免疫荧光法检测小鼠肿瘤组织中FAK活性。BAPN提前处理肿瘤建立前的模型小鼠,以及MEK抑制剂PD-325901处理移植肿瘤后的小鼠,用上述方法监测其肿瘤进展以及分析组织中胶原蛋白及MMP-10和MMP-9的表达。3.体外实验中使用Collagen l预涂板培养SKOV3细胞与OV-90细胞,通过体外细胞粘附试验检测胶原对细胞粘附的作用。Western blot实验与免疫荧光实验检测FAK-Rho-ERK通路相关蛋白表达水平。使用PD-325901以及PBS分别处理实验组及对照组SKOV3细胞与OV-90细胞,通过Western blot分析MMP-9、MMP-10以及P-ERK1/2蛋白表达水平,并通过CCK8检测细胞活性与增殖。结果卵巢癌转移灶组织中的纤维胶原蛋白与原发性肿瘤相比显著增加,证明ECM确实参与了卵巢癌进展过程。ApoE缺失可以导致ECM积聚并使腹腔微环境发生改变。金属蛋白酶的表达升高,增强了卵巢癌细胞的侵袭能力。ECM改变通过介导细胞与基质的粘附,激活FAK-ERK-MMP信号通路促进肿瘤进展。LOX抑制剂BAPN以及MEK抑制剂PD-325901处理可以通过抑制该信号通路活化,有效逆转ECM积聚、减少粘附并降低卵巢癌细胞的侵袭能力。结论ApoE缺失通过介导细胞外基质重塑,使FAK-ERK-MMP信号通路活化,增强了卵巢癌细胞的侵袭能力,促进卵巢癌的恶性进展。BAPN和PD-325901可以通过抑制ERK活化起到抑制肿瘤的作用,有效延缓卵巢癌进展。这个发现为进一步探索卵巢癌的新型治疗方法提供了动力。
【学位授予单位】：华中科技大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R737.31

【参考文献】