MicroRNA-152在子宫内膜癌孕激素抵抗中的作用研究

发布时间：2020-05-13 06:37

【摘要】：目的探讨miR-152在子宫内膜癌孕激素抵抗中的作用机制,寻找子宫内膜癌早期诊断和与靶向治疗有关的新标志物。方法1.利用免疫组织化学染色分析子宫内膜癌组织、子宫内膜增生不伴不典型增生组织和正常子宫内膜组织中的DNMT1及PR的表达情况。2.利用Real-time PCR分别检测子宫内膜癌组织(孕激素受体高表达组织和孕激素受体低表达组织)、子宫内膜增生不伴不典型增生组织和正常子宫内膜组织中的miR-152及其靶标DNA甲基转移酶1DNMT1的表达水平。3.选取孕激素受体PR表达水平不同的两种人子宫内膜癌细胞株Ishikawa(PR+,孕激素受体为高表达)和KLE(PR-,孕激素受体为低表达),利用Real-time PCR检测miR-152、DNMT1以及PRB在人子宫内膜癌细胞株中的表达水平。4.采用脂质体法将miR-152 mimic和inhibitor及其对照mimic NC和inhibitor NC瞬时转染子宫内膜癌细胞株Ishikawa和KLE。转染72h后,提取RNA,逆转录后Real-time PCR检测miR-152、DNMT1以及PRB的表达水平。5.将miR-152 mimic及其对照mimic NC瞬时转染子宫内膜癌细胞株KLE,在转染后0,48和72h进行CCK-8法检测细胞增殖情况。结果1.免疫组化染色结果显示:DNMT1在子宫内膜癌组织中的表达显著高于正常子宫内膜组织和子宫内膜增生不伴不典型增生组织,差异具有统计学意义(P0.0001)。而DNMT1在正常子宫内膜组织和子宫内膜增生不伴不典型增生组织中的表达差异无统计学意义(P=0.218)。PR在子宫内膜癌组织中的表达明显低于正常子宫内膜组织和子宫内膜增生不伴不典型增生组织,差异具有统计学意义(P0.0001)。而PR在正常子宫内膜组织和子宫内膜增生不伴不典型增生组织中的表达差异无统计学意义(P=0.202)。DNMT1在PR阴性子宫内膜癌组织中的表达明显高于PR阳性子宫内膜癌组织,差异具有统计学意义(P=0.002)。2.Real-time PCR结果显示:与正常子宫内膜组织相比,miR-152在子宫内膜癌组织中的表达水平明显降低,差异具有统计学意义(P0.0001)。与PRB(+)子宫内膜癌组织相比,miR-152在PRB(-)子宫内膜癌组织中的表达水平更低,差异具有统计学意义(P=0.0479)。与正常子宫内膜组织相比,DNMT1在子宫内膜癌组织中的表达水平明显升高,差异具有统计学意义(P0.0001)。与PRB(+)子宫内膜癌组织相比,DNMT1在PRB(-)子宫内膜癌组织中的表达水平更高,差异具有统计学意义(P=0.0389)。3.Real-time PCR结果显示:与子宫内膜癌孕激素受体高表达PRB(+)Ishikawa细胞相比,miR-152在子宫内膜癌孕激素受体低表达PRB(-)KLE细胞中的表达水平显著降低,DNMT1的表达水平显著升高,而PRB的表达水平显著降低,差异均具有统计学意义(P0.0001)。4.Real-time PCR结果显示:转染miR-152 mimic后,Ishikawa和KLE细胞株中miR-152的平均表达量均显著升高;而转染miR-152 inhibitor后,miR-152的平均表达量均显著降低。差异均具有统计学意义(P0.0001)。5.Real-time PCR结果显示:转染miR-152 mimic后,Ishikawa和KLE细胞株中DNMT1的平均表达量均降低,差异均具有统计学意义(Ishikawa:P=0.0004;KLE:P=0.0001);但与子宫内膜癌PR(+)Ishikawa细胞相比,DNMT1在子宫内膜癌PR(-)KLE细胞中的表达水平降低幅度较小,差异具有统计学意义(P=0.0026)。而转染miR-152 inhibitor后,DNMT1的平均表达量均升高,差异具有统计学意义(Ishikawa:P=0.0002;KLE:P0.0001);但与子宫内膜癌PR(+)Ishikawa细胞相比,DNMT1在子宫内膜癌PR(-)KLE细胞中的表达水平升高幅度较大,差异具有统计学意义(P=0.0192)。6.Real-time PCR结果显示:转染miR-152 mimic后,Ishikawa和KLE细胞株中PRB的平均表达量均升高,差异均具有统计学意义(P0.0001);但与子宫内膜癌PR(+)Ishikawa细胞相比,PRB在子宫内膜癌PR(-)KLE细胞中的表达水平升高幅度较小,差异有统计学意义(P=0.0002)。而转染miR-152 inhibitor后,PRB的平均表达量均降低,差异具有统计学意义(P0.0001);但与子宫内膜癌PR(+)Ishikawa细胞相比,PRB在子宫内膜癌PR(-)KLE细胞中的表达水平降低幅度较大,差异具有统计学意义(P=0.0047)。7.CCK-8法检测结果显示:KLE细胞在转染miR-152 mimic 48h后,细胞生长缓慢,细胞增殖抑制(P=0.0024);在转染miR-152 mimic 72h后,细胞增殖抑制则更为明显(P=0.001)。差异均具有统计学意义。结论5.1 miR-152在子宫内膜癌组织中表达下调,在子宫内膜癌发生发展过程中起到了抑癌基因的作用。5.2 miR-152的下调及其靶标DNMT1的上调在子宫内膜癌PRB的下调或缺失中起到促进作用,可能存在miR-152-DNMT1-PRB调节通路,在子宫内膜癌孕激素抵抗的过程中发挥作用。5.3 miR-152可能作为子宫内膜癌孕激素抵抗靶向治疗的新生物学指标。
【图文】：

pre-miR-148/152家族的茎环结构

miR-148/152家族成员的成熟miRNA序列
【学位授予单位】：暨南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R737.33

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本文编号：2661557