多环芳烃暴露与RAR-β、MGMT基因CpG岛甲基化在宫颈上皮内瘤变中的交互效应

发布时间：2020-05-27 18:56

【摘要】：目的:宫颈上皮内瘤变(CIN)是子宫颈癌的癌前病变,发展为宫颈癌一般需要8-12年,寻找影响CIN进展的关键因子对阻断宫颈癌的发生至关重要。人乳头瘤病毒(HPV)持续感染是子宫颈癌及CIN发生发展的最主要原因,尽管女性HPV感染率很高,但只有不超过1%的HPV感染妇女进展为宫颈癌,即使是高危型HPV持续感染,也仅有约12%的妇女继续发展为CIN和宫颈癌,因此势必存在其他因素影响宫颈癌的发生发展。近年来环境污染与子宫颈癌的关系逐渐引起各国学者的关注,DNA甲基化与宫颈癌的发生发展密切相关,研究发现多环芳烃(PAHs)暴露可能引起DNA甲基化异常,但关于PAHs与抑癌基因DNA甲基化在宫颈病变中的相互关系尚未见相关报道。本次研究旨在探讨PAHs在CIN中的作用以及PAHs与RAR-β及MGMT基因CpG岛甲基化在CIN中的相互关系,为进行CIN病因学的研究提供理论依据,为CIN防治措施的制定开拓新思路。方法:本次研究对象来源于课题组2014年6月至9月建立的山西省阳曲县和介休市自然人群研究队列,从液基薄层细胞检测技术(TCT)筛查出的宫颈细胞学异常妇女(TBS系统诊断≥ASC-US)中,选取经阴道镜检查,最终经病理学确诊的低度宫颈上皮内瘤变(CINⅠ)患者107例、高度宫颈上皮内瘤变(CINⅡ/Ⅲ)患者98例以及正常宫颈(NC)妇女138例。采用结构式问卷收集所有研究对象的人口学特征、生活习惯、生殖情况和既往病史等信息。采用导流杂交法检测HPV感染状态及分型,高效液相色谱法(HPLC)检测尿中1-OHP水平,特异性甲基化PCR法(MSP)检测RAR-β及MGMT基因CpG岛甲基化状态。应用SPSS20.0软件进行相关资料的Kruskal-Wallis H检验、χ~2检验和Logistic回归。应用相加模型进行交互作用分析,并计算RERI、API、S评价交互作用。应用Amos21.0进行路径分析,采用拟合优度指数(GFI)、调整自由度的GFI(AGFI)、比较拟合指数(CFI)、正规拟合指数(NFI)、增值适配指数(IFI)、均方根残差(RMR)评价拟合效果。结果:1.HPV感染与宫颈上皮内瘤变的关系:HPVs在NC组、CINⅠ组和CINⅡ/Ⅲ组的感染率分别是31.9%、44.9%和63.3%,高危型HPV在NC组、CINⅠ组和CINⅡ/Ⅲ组的感染率分别是29.7%、43.0%和62.2%,HPV16在NC组、CINⅠ组和CINⅡ/Ⅲ组的感染率分别是6.5%、14.0%和40.8%。HPVs、高危型HPV和HPV16感染率在CINⅠ组和CINⅡ/Ⅲ组均分别高于NC组,在CINⅡ/Ⅲ组均分别高于CINⅠ组,并且随着宫颈上皮内瘤变程度的加重,HPVs、高危型HPV和HPV16感染率逐渐升高(χ~2_(趋势)=22.528,P0.001;χ~2_(趋势)=24.392,P0.001;χ~2_(趋势)=42.014,P0.001)。2.尿中1-羟基芘水平与宫颈上皮内瘤变的关系:各组尿中1-羟基芘浓度的总体分布不全相同(H=64.812,P0.001),多重比较显示,CINⅡ/Ⅲ组1-羟基芘浓度高于CINⅠ组和NC组,CINⅠ组1-羟基芘浓度高于NC组,随着宫颈上皮内瘤变程度的加重,1-羟基芘浓度逐渐升高。进一步以NC组的1-羟基芘浓度的中位数为界值划分为低暴露组(≤0.07μmol/molCr)和高暴露组(0.07μmol/molCr)进行分析的结果显示,在调整宫颈病变相关因素后,1-OHP高暴露可增加罹患CINⅠ(OR=1.72,95%CI:1.02-2.90)和CINⅡ/Ⅲ(OR=3.92,95%CI:2.14-7.19)的风险,随着宫颈上皮内瘤变程度的加重,1-OHP高暴露率逐渐升高(χ~2_(趋势)=23.955,P0.001)。1-羟基芘与HPVs、HR-HPV感染在CINⅠ和CINⅡ/Ⅲ组存在正相加交互作用,1-羟基芘与HPV16感染在CINⅡ/Ⅲ组存在正相加交互作用,但在CINⅠ组未显示存在交互作用。3.抑癌基因RAR-β、MGMT CpG岛甲基化与宫颈上皮内瘤变的关系:对各组的抑癌基因RAR-β、MGMT启动子区CpG岛甲基化状况进行分析,结果显示,CINⅡ/Ⅲ组RAR-β和MGMT基因CpG岛甲基化率(19.4%;19.4%)均高于NC组(6.5%;5.1%),差异均有统计学意义(χ~2=9.072,P=0.003;χ~2=11.979,P=0.001),但在NC组与CINⅠ组未发现RAR-β和MGMT基因甲基化率的差异有统计学意义(χ~2=0.316,P=0.574;χ~2=0.606,P=0.436);随着宫颈上皮内瘤变程度的加重,RAR-β和MGMT基因CpG岛甲基化率均呈现逐渐升高趋势(χ~2_(趋势)=9.178,P=0.002;χ~2_(趋势)=12.302,P0.001)。4.1-OHP水平与抑癌基因RAR-β、MGMT CpG岛甲基化在宫颈上皮内瘤变中的关系:采用相加模型进行1-羟基芘与RAR-β、MGMT基因CpG岛甲基化在宫颈上皮内瘤变中的交互作用分析,结果显示1-羟基芘与RAR-β、MGMT基因CpG岛甲基化在CINⅡ/Ⅲ组存在正相加交互作用,但在CINⅠ组未显示存在交互作用。通过路径分析可知1-羟基芘不仅对宫颈病变有直接效应,同时还可能通过RAR-β、MGMT基因CpG岛甲基化对宫颈病变产生间接效应,其中直接效应更为显著。结论:1.HPVs感染、HR-HPV感染和HPV16感染均可使妇女患CIN的风险增加,因此,实施HPV筛查,特别是高危型HPV,有助于降低宫颈癌的发生风险。2.1-OHP高暴露可增加罹患宫颈上皮内瘤变的风险,因此,采取有效措施控制环境污染,日常生活中尽量减少PAHs暴露,对于控制CIN进展具有重要意义。3.RAR-β、MGMT基因CpG岛高甲基化可能增加高度宫颈上皮内瘤变的发生风险,可作为高度CIN阶段的辅助分子生物学标志物,用于宫颈癌早期检测。4.1-OHP高暴露与RAR-β、MGMT基因CpG岛高甲基化之间的交互作用可能增加高度宫颈上皮内瘤变的发生风险,1-OHP可能通过影响RAR-β、MGMT基因CpG岛甲基化从而影响宫颈病变的进展,可为CIN病因及发病机制的研究提供理论依据,有助于控制CIN进展,延缓甚至阻断宫颈癌的发生发展。
【图文】：

高效液相色谱,高效液相色谱,尿肌酐,1-羟基芘

图 2 高效液相色谱图）尿肌酐结果校正按肌酐测定试剂盒（苦味酸法）说明书进行操作。根据公式[肌酐校正后浓ol/mol Cr ) =实际浓度(pmol/L)/尿肌酐(μmol/L)]计算 1-羟基芘校正浓度。

宫颈病变,1-羟基芘

注： M±Q：中位数±四分位数间距；组间比较时相同字母表示差异无统计学意义，不同字母表示差异有统计学意义；aOR*为对被动吸烟、洗澡频率、绝经调整后的OR值图6 不同宫颈病变组尿中1-OHP水平Figure 6 1-OHP levels in the urine of different cervical lesions4.2 PAHs 暴露水平与 HPV 感染在宫颈上皮内瘤变中的交互效应采用相加模型进行 1-羟基芘与 HPV 感染在宫颈上皮内瘤变中的交互作用分析，，结果显示 1-羟基芘与 HPVs、HR-HPV 感染在 CINⅠ和 CINⅡ/Ⅲ组存在正相加交互作用，1-羟基芘与 HPV16 感染在 CINⅡ/Ⅲ组存在正相加交互作用，但在 CINⅠ组未显示存在交互作用，见表 9。表9 1-羟基芘与HPV感染在宫颈上皮内瘤变中的交互作用Table9 Interaction between 1-OHP and HPV infection in cervical intraepithelial neoplasia组别1-OHP(μmol/molCr)HPVs OR(95%CI) aOR* (95%CI) RERI API SCINⅠ组≤0.07 － 1.00 1.00＞0.07 － 1.63(1.11-2.39) 1.57(1.07-2.31)0.96(0.06-1.86)0.47(0.09-0.84)10.28(0.01-25770.57)≤0.07 ＋ 0.47(0.17-1.29) 0.44(0.16-1.21)＞0.07 ＋ 2.07(1.42-3.01) 2.00(1.36-2.94)
【学位授予单位】：山西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R737.33

【参考文献】