FTO基因对多囊卵巢综合征及其辅助生殖结局的影响

发布时间：2020-05-31 13:43

【摘要】：目的:通过分析FTO基因中rs79206939A/G、rs9930506A/G、rs8050136A/C和rs1588413C/T多态位点与多囊卵巢综合征(PCOS)的相关性及对PCOS患者妊娠结局(IVF)的影响。同时检测FTO、IRX3和IRX5蛋白在4种不同表型即PCOS肥胖、PCOS非肥胖、对照肥胖和对照非肥胖中的表达变化,探讨FTO在PCOS中的可能作用。方法:本实验随机选取2015年12月到2017年12月在南华星辉生殖健康医院就诊的不孕患者为研究对象,其中333例作为实验组,183例由于男方因素不孕而就诊的女性为对照组。PCOS患者的确诊及纳入标准按照2003年的鹿特丹会议制定的原则实施。采集所有受试对象的静脉血2 m L和临床资料。本实验采用分子开关(on-off switch)和限制性片段长度多态性(RFLP)两种经典的方法对基因进行分型。继而统计不同基因型的出现频率,然后分析其在实验组和对照组中有无差异。根据收集样本的身体质量指数(BMI)进一步把样本分为4组:PCOS肥胖(BMI"g25 kg/m2)、PCOS非肥胖、对照肥胖和对照非肥胖组。收集受试对象的卵泡液和颗粒细胞并提取其中蛋白,Western-Blot分析FTO、IRX3和IRX5这三种蛋白在四种不同表型中的表达情况。根据已分型的样本,查阅医院档案资料,分析不同基因型的IVF结局的影响。结果:1.rs79206939A/G多态中AA、AG、GG在PCOS组中频率分别为3.0%、23.1%、73.9%,与对照组中的3.3%、16.4%、80.3%相比p值为0.197,无显著差异;AA+AG和GG在实验组的频率分别为26.1%、73.9%,与对照组中的19.7%、80.3%相比p值为0.100,无统计学差异;等位基因A和G在实验组中的频率分别为14.6%和85.4%,与在对照组中的11.5%和88.5%相比p值为0.164,仍无统计学意义。在临床生化数据的分析中,无论是在实验组或是对照组,其指标都无显著差异。做IVF分析时,PCOS大组中,AA+AG亚组的优胚率和移植率均显著高于GG亚组(p=0.020;0.018)。2.rs9930506A/G多态中GG、AG、AA在PCOS组中的频率分别为1.2%、30.9%、67.9%,与对照组中的1.1%、27.3%、71.6%相比p值为0.682,无统计学意义;隐性模型GG+AG和AA在实验组中的频率分别为31.2%和68.8%,与对照组中的28.4%、71.6%相比p值为0.382,无显著差异;等位基因G和A在实验组中的频率分别为16.7%、83.3%,在对照组中频率分别为14.8%、85.2%,分析得出p值为0.423,无显著差异。在临床生化数据的比较中,PCOS组中在GG+AG和AA两个亚组中睾酮水平具有显著差异(p=0.008),其他指标均无显著差异。在IVF分析中,PCOS组中的GG+AG和AA两亚组中各个指标也没有显著差异3.rs8050136A/C中AA、AC和CC在PCOS组中的频率分别为1.5%、15.3%和83.2%,在对照组中频率分别为1.0%、7.1%和91.9%,p值为0.009,有统计学意义;AA+AC与CC在实验组中频率分别为16.8%、83.2%,与对照组的8.2%、91.8%相比p值为0.007,有统计学意义;等位基因A和C在实验组中频率分别为9.2%、90.8%,与对照组的4.6%、95.4%相比p值为0.023,有统计学意义。在临床生化数据的比较中,在PCOS组中AA+AC与CC组中,身体质量指数(BMI)和卵泡刺激素(FSH)有显著差异(p=0.030;0.006),其他指标均无差异,且在对照组中,各个临床指标也均无差异。做IVF分析时,只有排卵数在AA+AC组与CC组中有显著差异(p=0.015),其余无显著差异。4.rs1588413C/T多态中TT、CT、CC在PCOS组中的频率分别为1.2%、46.8%、52.0%,在对照组中的频率分别为1.6%、35.5%、62.9%,分析得出p值为0.045,有统计学意义;隐性模型中TT+CT和CC组中的频率分别为48.0%和52.0%,对应在对照组中的频率为37.2%和62.8%,分析得出p值为0.017,有统计学意义;等位基因T和C在实验组中的频率分别为24.6%和75.4%,对应的在对照组中为19.4%和80.6%,p值为0.055,无统计学意义。在临床生化数据的分析中发现,PCOS组中的TT+CT亚组和CC亚组中的黄体生成素(LH)和雌二醇(E2)均有显著差异(p=0.018;0.041),其他指标均无显著差异。做IVF分析时,PCOS大组中,TT+CT亚组的移植率显著高于CC亚组(p=0.024)。5.卵泡液中,FTO蛋白在肥胖样本中的表达量显著高于非肥胖表型的样本,IRX3蛋白与FTO蛋白刚好相反,其在肥胖表型中的表达量显著低于非肥胖表型的样本。而IRX5蛋白表达量比较复杂,它在a(PCOS肥胖vs PCOS非肥胖)、b(对照肥胖vs对照非肥胖)、c(PCOS肥胖vs对照肥胖)、d(PCOS非肥胖vs对照非肥胖)四组中表达都显示有差异,在a组比较中,肥胖亚组中的表达量显著高于非肥胖亚组;而当在b组做比较时,肥胖亚组中的表达量却又反过来显著低于非肥胖亚组;在c组的比较中,明明PCOS肥胖组的表达量高;但是当在d组做比较时,对照非肥胖的表达量却又增高了。6.卵巢颗粒细胞中,FTO蛋白在肥胖表型的样本中表达量显著高于非肥胖的样本,当在c组分析时,在前者的表达量更高。IRX3蛋白和FTO蛋白的表达趋势刚好相反,其在肥胖表型样本的表达量显著低于非肥胖表型的样本;且在c组的比较中,PCOS肥胖组的表达量较低;在d组的比较中,PCOS非肥胖组的表达量较低。IRX5蛋白在无论是在肥胖还是非肥胖,PCOS组的表达量往往是显著高于对照组。结论:1.FTO基因rs8050136A/C多态和rs1588413C/T多态与PCOS相关。2.FTO基因rs9930506A/G多态与PCOS患者睾酮水平相关;rs8050136A/C多态与PCOS患者的BMI和FSH水平相关;rs1588413C/T多态与PCOS患者的LH和E2水平相关。3.不管是在卵泡液还是在颗粒细胞中,FTO蛋白在肥胖表型中的表达量往往显著高于非肥胖组,而IRX3恰恰相反,其在肥胖组中的表达量又往往显著低于非肥胖组。IRX5的表达量受多因素的影响,它既受PCOS与否的影响也受肥胖与否的影响,且它在不同组织中如卵泡液和颗粒细胞表达不同。4.FTO基因rs79206939A/G多态与PCOS患者优胚率和移植率有关;rs8050136A/C多态与PCOS排卵数有关;rs1588413C/T多态与PCOS患者的移植率相关。
【图文】：

电泳图,多态,电泳图,后曝光

同的基因型：AA、AG 和 GG。根据实验原理，扩增、电泳、BsaAⅠ酶切再电泳后曝光一条带的为 AA 纯合子，长度为 294bp；电泳后曝光两条带的为 GG 纯合子，长度分别为 230bp 和 64bp；电泳后呈现出三个条带的为 AG 杂合子，长度分别为 294bp、230bp 和 64bp。(图 4.5)

电泳图,多态,电泳图,分型

4.5 FTO 基因 rs8050136A/C 位点分析4.5.1 rs8050136A/C 多态性分析此位点采用 on-off switch 方法进行分型，分型结果如图 4.9 所示。经过分型，rs8050136 呈现出三种基因型：AA、AC 和 CC。纯合子 AA，，结束电泳后，会曝光出左关（无）右开（有）的条带现象；纯合子 CC，经过电泳后，会曝光出左开（有）右关（无）的条带现象；杂合子 AC，完成电泳后，会曝光出左开（有）右开（有）的条带现象。由于在 PCR 过程中也会产生引物二聚体，故在每一个泳道的下方都会出现引物二聚体的成像。
【学位授予单位】：南华大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R711.75

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