子宫内膜异位症中nm23-H1与MT1-MMP的表达及相关性研究

发布时间：2020-06-08 16:47

【摘要】：目的:探求子宫内膜异位症中nm23-H1基因、MT1-MMP基因的表达情况,了解子宫内膜异位症的发生与nm23-H1基因和MT1-MMP基因的相关性,为子宫内膜异位症的临床诊断、预防、治疗提供新的思路。方法:通过取正常子宫内膜及异位症组织各10例,经消化分离后原代培养间质细胞,待细胞贴壁后对异位症组细胞加入0,10~-88 mol/L,10~-55 mol/L三种浓度17β-雌二醇(17β-Estradiolum)予以刺激,48 h后收集细胞,用Trizol试剂提取细胞总RNA,逆转录生成cDNA,利用qRT-PCR技术检测正常及异位子宫内膜细胞中nm23-H1基因及MT1-MMP基因的mRNA表达情况;另取正常及异位子宫内膜,利用冰冻切片、HE试剂盒染色、激光捕获显微切割技术,获取子宫内膜腺上皮细胞,经微量试剂盒提取RNA后,反转录成cDNA,采用Q200微滴式数字PCR方法检测nm23-H1基因及MT1-MMP基因在正常及异位子宫内膜上皮细胞中mRNA的表达情况。结果:1.nm23-H1基因在正常子宫内膜组织和子宫内膜异位症组织原代培养的间质细胞中mRNA的表达水平分别是0.978±0.256、0.321±0.111,两者相比子宫内膜异位症中nm23-H1基因的mRNA表达水平低于正常子宫内膜对照组的表达情况,P=0.026,差异有统计学意义。2.MT1-MMP基因在正常子宫内膜组织和子宫内膜异位症组织原代培养的间质细胞中mRNA的表达水平分别是0.508±0.141、1.438±0.277,两者相比子宫内膜异位症中MT1-MMP基因的mRNA表达水平高于正常子宫内膜对照组的表达情况,P=0.011,差异有统计学意义。3.经0、10~-88 mol/L、10~-55 mol/L不同浓度雌激素刺激后,子宫内膜异位症组织消化后原代培养的间质细胞中nm23-H1基因的表达情况分别为1.028±0.189、0.553±0.204、0.271±0.099,随着雌激素浓度的升高,子宫内膜异位症间质细胞中nm23-H1基因的mRNA表达水平越来越低,未加雌激素组与10~-55 mol/L浓度雌激素刺激组之间有显著差异;MT1-MMP基因的mRNA的表达情况分别是1.599±0.722、4.580±2.240、3.383±1.784,在雌激素刺激组的表达均有升高,其中10~(-5) mol/L浓度组表达最高,但各组间差异没有显著性趋势。4.nm23-H1基因在正常子宫内膜及内异症组织上皮细胞的mRNA表达情况分别是0.097±0.019、0.048±0.008,两者相比子宫内膜异位症中nm23-H1基因的表达水平低于正常子宫内膜对照组的表达情况,P=0.049,差异有统计学意义。5.MT1-MMP基因在正常子宫内膜及内异症组织上皮细胞的mRNA表达情况分别是0.219±0.041、0.416±0.062,两者相比子宫内膜异位症中MT1-MMP基因的表达水平高于正常子宫内膜对照组的表达情况,P=0.017,差异有统计学意义。结论:1.相比于正常子宫内膜组织原代培养的间质细胞,子宫内膜异位症组织原代培养的间质细胞中nm23-H1基因的mRNA表达降低,MT1-MMP基因的mRNA表达升高,这与实验室前期对子宫内膜异位症组织的研究结果一致,nm23-H1作为肿瘤抑制基因参与了子宫内膜异位症的发生。nm23-H1基因的表达是否会影响MT1-MMP从而导致子宫内膜异位症的发生有待更深层次的探究。2.随着雌激素浓度的增加,nm23-H1基因的mRNA表达有下降的趋势,MT1-MMP基因的表达增加,但各组间统计无显著性差异,后续可以增加样本量,优化细胞培养方案,进一步研究以明确两者之间的关系。3.激光捕获子宫内膜上皮细胞经dd-PCR技术发现与正常对照组相比nm23-H1基因的mRNA在Qg异组中表达降低,MT1-MMP基因的mRNA表达增高,子宫内膜异位症中上皮细胞可能与间质细胞发生共同的作用。
【图文】：

图 1 腺上皮细胞贴壁后 图 2 间质细胞贴壁后Fig1 epitheial cells adherent Fig2 stromal cells adherent2 nm23-H1、MT1-MMP 基因在子宫内膜间质细胞中的 mRNA表达

图 1 腺上皮细胞贴壁后 图 2 间质细胞贴壁后Fig1 epitheial cells adherent Fig2 stromal cells adherent2 nm23-H1、MT1-MMP 基因在子宫内膜间质细胞中的 mRNA表达
【学位授予单位】：皖南医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R711.71

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本文编号：2703364