LN-α5在子痫前期发病中的功能研究

发布时间：2020-06-18 23:56

【摘要】：目的检测层粘连蛋白-α5(Laminin,LN)在子痫前期(Preeclampsia,PE)胎盘组织中的定位和表达,研究LN-α5在人滋养细胞株HTR8/SVneo和脐静脉内皮细胞株HUVEC中的表达及对生物学功能的作用和影响,探讨LN-α5在HTR8/SVneo细胞中对PI3K信号通路中的影响,为PE的诊疗依据提供新的思路。方法1.采用qRT-PCR、Western blotting和免疫荧光检测PE和正常妊娠孕妇胎盘组织中LN-α5的定位和含量;2.将 LN-α5 小分子干扰 RNA(siLN-α5)转染 HTR8/SVneo 和HUVEC细胞,并采用qRT-PCR、Western blotting和免疫荧光检测其干扰效率;3.成功干扰LN-α5表达后,采用CCK-8法检测HTR8/SVneo和HUVEC细胞的增殖能力;采用Transwell侵袭实验检测HTR8/SVneo和HUVEC细胞的侵袭能力;采用内皮细胞血管形成实验检测HUVEC细胞的血管管腔形成能力;4.采用缺氧/复氧处理HTR8/SVneo和HUVEC细胞以模仿PE中氧化应激对细胞的损伤,处理后采用qRT-PCR、Western blotting和细胞免疫荧光检测HTR8/SVneo和HUVEC细胞中LN-α5的表达、定位及对细胞的增殖、侵袭、凋亡及血管管腔形成能力等生物学功能的影响。5.在 HTR8/SVneo 细胞中,采用 Western blotting 检测 LN-α5 在 PI3K/AKT信号通路中的作用。结果1.LN-α5在PE胎盘组织中的基因及蛋白表达较正常妊娠组明显降低;2.干扰LN-α5的表达后可影响HTR8/SVneo和HUVEC细胞的生物学功能,包括降低了 HTR8/SVneo和HUVEC细胞的增殖和侵袭能力,降低了 HUVEC细胞的血管管腔形成能力;3.HTR8/SVneo和HUVEC细胞缺氧/复氧处理后细胞中LN-α5的表达明显降低,并且HTR8/SVneo和HUVEC细胞的增殖和侵袭能力降低,凋亡功能增加,HUVEC细胞的血管管腔形成能力降低;4.在HTR8/SVneo细胞中,缺氧/复氧处理后降低了 PI3K/AKT信号通路中p-AKT和p-mTOR磷酸化的水平。结论LN-α5通过调控HTR8/SVneo和HUVEC中的生物学功能及对PI3K信号通路的影响,参与调控了 PE过程中胎盘的形成过程。
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R714.244
【图文】：

采用ｑＲＴ－ＰＣＲ技术检测子痫前期和正常妊娠胎盘组织中ＬＮ－ａ５邋ｍＲＮＡ水平，逡逑结果显示子痫前期胎盘组织中ＬＮ－ｃｔ５邋ｍＲＮＡ的表达较正常妊娠组明显降低，差异逡逑具有统计学意义（ｐ＜0．0５），见图１。逡逑Ａ逡逑ｅ邋１．５１逡逑0＜逦—Ｉ—逡逑＊３５＾逡逑ＬＥＵ）逡逑ｆ邋ＩＴ）逡逑ａ邋０．０＿Ｌ＾——「－－１邋』逡逑Ｎ逦ＰＥ逡逑图１邋－邋１．邋ＬＮ－ａ５在正常任娠和子痫前期胎盘组织中ｍＲＮＡ的表达水平逡逑Ｆｉｇｕｒｅ邋１－１．邋Ｔｈｅ邋ｍＲＮＡ邋ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ邋ｏｆ邋ＬＮ－ａ５邋ｉｎ邋ＰＥ邋ａｎｄ邋ｎｏｒｍａｌ邋ｃｏｎｔｒｏｌｓ邋ｍｅａｓｕｒｅｄ邋ｂｙ邋ｑＲＴ－ＰＣＲ．逡逑ｐ－ａｃｔｉｎ邋ｗａｓ邋ｕｓｅｄ邋ａｓ邋ｃｏｎｔｒｏｌ．邋（（邋＊ｐ邋＜邋０．０５）逡逑３．３逦ＬＮ－ａ５在子痫前期胎盘组织中的蛋白表达逡逑采用Ｗｅｓｔｅｒｎ邋ｂｌｏｔｔｉｎｇ技术检测子痫前期和正常妊娠胎盘组织中ＬＮ－ａ５的蛋白逡逑含量，结果显示：正常妊娠组胎盘组织中ＬＮ－ａ５的蛋白水平较子痫前期组明显增逡逑高，差异具有统计学意义（ｐ＜邋０．０５），见图２。逡逑ＬＮ－？５邋蠢系一邋—一逦逦４0４邋ＫＤ逡逑｜）ｕＡｃｔｉｉ．ｉ邋——逦＾邋—逦—－邋—邋４３逡逑１逦２．５１逡逑＝２．０－逦￣ｒ逡逑％？邋１．５－逡逑以丁逡逑２逦ｏ，ｗ逦逦

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本文编号：2720010