咖啡因对早期胚胎重量及卵黄膜细胞增殖情况和血管发育的影响

发布时间：2020-07-22 01:10

【摘要】：目的关于孕妇大量饮用咖啡因的相关研究指出,咖啡因是引起低体重儿的重要原因之一,但是具体的作用机制尚不完全清楚。本研究主要目的是借助于鸡胚卵黄囊模型来探讨孕早期咖啡因摄入过多是否会影响到卵黄囊对营养物质的吸收,从而导致影响到胚胎的生长发育。初步探索研究妊娠期妇女摄入咖啡因,对胎儿发育速度所造成的影响,以及其发生的机制,从而对妊娠期妇女安全而且合理的饮食提供科学的依据,实现我们所倡导的优生优育、提高人口素质的目的,具有重要的伦理价值和现实指导意义。万法本研究以鸡胚为实验模型,分为对照组、低剂量组、中剂量组、高剂量组。新鲜种鸡蛋分组后37℃横向孵化2天,在蛋壳上开窗,在卵黄膜部位给予不同剂量的咖啡因,对照组给予同体积的PBS,然后用透气胶带封好,继续培养6天后取出胚胎和卵黄膜组织。对胚胎进行测重,随后根据对卵黄膜组织通过HE染色进行形态学分析,利用RT-PCR从分子学方面分析胚胎发育中p185和p21的变化,然后利用免疫荧光染色法进一步分析卵黄膜的细胞增殖和凋亡情况。结果1.胚胎重量测量结果与对照组相比,随着咖啡因浓度的升高,胚胎体重有下降的趋势。正常组与中剂量组差异有统计学意义(P0.05),正常组与高剂量组有明显差异(P0.01);2.卵黄膜HE染色实验结果与对照组相比,中剂量组和高剂量组的卵黄膜血管发育程度较差,血管密度显著降低,H.E染色后可以观察到各个实验组在组织形态方面的发育状态存在着明显的差异;3.PT-PCR实验结果与对照组相比,实验组p185的表达有随着咖啡因浓度升高而降低的趋势,p21 RT-PCR结果显示随着咖啡因剂量的增高卵黄膜的细胞周期抑制基因表达增加;4.卵黄膜组织细胞增殖凋亡的变化与对照组相比,PH3染色显示胚胎随着暴露咖啡因剂量的增加,卵黄膜的组织的细胞增殖能力减弱,而TUNEL染色结果则与其相反,随着咖啡因浓度的升高,其凋亡程度增加;结论咖啡因通过影响胚胎卵黄膜的血管发育,使血管分布密度降低,血管直径下降,发育成熟的血管数量减少。同时卵黄膜细胞增殖减弱,细胞凋亡程度增加,从而影响了卵黄膜对营养物质的吸收和运输,进而影响了胚胎的发育。为证明妊娠期妇女早期大剂量的摄入咖啡因,能通过影响胎盘绒毛的发育影响营养物质的吸收从而影响到胚胎的正常发育提供了数据支持。
【学位授予单位】：沈阳医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R715.3
【图文】：

图１胚胎发育情况及重量统计分析逡逑注：Ａ：种蛋培养操作时间流程；Ｂ：各实验组胚胎的整体发育情况；Ｃ：各实验组统计分中剂量的体重与对照组有统计学差异（Ｐ〈０．０５），高剂量组的体重与对照组有显著的统计差异（Ｐ邋＜０．０１），而低剂量组与对照组不存在差异（Ｐ＞邋０．０５）逡逑表１胚胎重量统计分析逡逑组别逦胚胎重量（ｇ）逦Ｐ逡逑对照组逦４．４邋±０．２逦—逡逑低剂量组逦３．９邋±０．２逦０．１１逡逑中剂量组逦３．邋４邋土邋０．２逦０．邋０３１逡逑高剂量组逦１．９±０．４逦０．０１逡逑二、咖啡因对胚胎早期发育卵黄膜形态的影响逡逑

实验组在组织形态方面的发育状态存在着明显的差异，随着暴露咖啡因剂量的增逡逑加，卵黄膜内发育成熟的血管数量明显减少。同时不同实验组的卵黄膜的Ｐ１８５基逡逑因表达的ＲＴ－ＰＣＲ的结果显示随着咖啡因浓度的增高有降低的趋势（图２）。逡逑１７逡逑

（一）胚胎发育的概述逡逑胚胎早期发育阶段通常是在第一至第八周，这个阶段也称为胚期［１３］。在这个早逡逑期阶段，经过分裂增殖和分化的受精卵，形成桑椹胚、胚泡，如图８所示。同时，逡逑这个时期胚胎对环境中有害因敏感程度很高，而且一些病毒、药物以及恶劣的环逡逑境因素对胚胎造成的伤害也往往是不可逆的，且会伴随机体终生，并影响到机体逡逑以后各个生命阶段的生长发育［１５］。逡逑外胚层逡逑／内细胞团逦＼逡逑Ｘ逦内胚层—逡逑囊胚原肠胚逡逑图８胚胎形态逡逑３５逡逑

【参考文献】

相关期刊论文 前10条

1 杨慕坤;白文佩;;咖啡因与妊娠相关不良事件的关系[J];中国全科医学;2017年03期

2 宋文兰;;胎儿宫内发育迟缓相关因素的探讨[J];中国优生与遗传杂志;2017年01期

3 曹亚男;郝建秀;张雯珂;王莉;姚元庆;;线粒体DNA与早期胚胎发育的研究进展[J];国际生殖健康/计划生育杂志;2016年04期

4 刘寒e

本文编号：2765094