CA125、HOXA10及HOX位点lncRNA（HOXA11-AS）在早期子宫内膜异位症相关不孕患者中的预测价值及机制

发布时间：2020-07-30 14:04

【摘要】：研究背景子宫内膜异位症(简称内异症)是有功能的子宫内膜组织在子宫腔以外的部位存在和生长,是一种雌激素依赖性疾病,与盆腔疼痛及不孕密切相关。内异症是育龄期女性的常见病,发病率约为10%,也是不孕症的常见原因之一。既往研究表明,25%～50%的不孕妇女患有子宫内膜异位症,内异症的患者中不孕症高达30%～50%。在盆腔检查正常的妇女,腹腔镜检查发现超过50%的患者患有子宫内膜异位症。迄今为止,针对子宫内膜异位症发病机制所做的基础实验到临床研究,还没有完全阐明子宫内膜异位症造成不孕的明确机制,推测可能与粘连造成盆腔解剖学改变和免疫因素等相关。轻度和重度子宫内膜异位症导致不孕的机制是否不同,这些都没有明确的答案。因为中重度子宫内膜异位症可能引起盆腔粘连,导致输卵管扭曲影响输卵管蠕动,从而影响受精卵的运行而导致不孕。其引起不孕的问题可能早期诊断并得到重视。而轻度子宫内膜异位症导致的不孕,因症状轻微或者没有症状,不能及早地被识别或者重视,导致轻度内异症相关不孕患者的诊断和治疗的延迟。怎么能做到早期诊断和治疗,而又不过度治疗,这成为临床研究的重点。因此,临床上亟需一种既高度敏感又具有特异性的生物标志物。我们在生殖外科的临床实践中发现,不孕症患者血清CA125在20与35U/ml之间时,与腹腔镜下轻度子宫内膜异位症的诊断有一定的吻合性,是否作为卵巢肿瘤标志物的CA125在预测内异症相关不孕时有不同于35U/ml的血清检测阈值?另外,子宫内膜异位症和低生育能力之间的关系还未确定,许多问题存在困惑,例如子宫内膜异位症患者的输卵管大多数是通畅的,即使是重度盆腔粘连,输卵管多数亦是通畅的,不孕可能并不是因为输卵管不通;很多没有盆腔粘连、内异症症状很轻微或者没有症状仅腹腔镜术中发现轻度腹膜型内异症的患者也会出现不孕。理论上讲免疫因素的改变理应发生在所有内异症患者中,但也有部分内异症患者可以自然妊娠。有研究表明,着床失败可能是导致腹膜型子宫内膜异位症患者不孕的潜在原因之一。而HOXA10的表达对胚胎着床和子宫内膜容受性是必要的。人类共有39个HOX基因,共分为A、B、C、D4个基因簇,HOXA基因簇中对胚胎着床影响最大的是HOXA10基因,其对胚胎和子宫的发育至关重要。文献报道,HOX位点IncRNAHOXAll-AS被预测可以顺式调控HOXA10 mRNA的表达。我们从子宫内膜容受性着眼锁定目标基因为HOX位点lncRNA HOXAl1-AS,探讨HOXA11-AS是否参与子宫内膜异位症相关不孕患者的发生发展或者子宫内膜容受性的改变过程。研究目的通过回顾性分析内异症不孕患者腹腔镜手术前血清CA125水平、在位内膜HOXA10的表达情况以及内异症患者术后妊娠率,从多个层面探讨CA125水平对轻度子宫内膜异位症相关不孕患者的早期预测价值。并通过研究HOX位点IncRNAHOXAll-AS在子宫内膜异位症的在位子宫内膜、异位子宫内膜的表达,以探讨IncRNA HOXA11-AS在子宫内膜异位症相关不孕的发病机制中的作用。研究方法收集2014年3月至2016年8月在烟台毓璜顶医院因不孕症行腹腔镜手术的患者共196例。196例患者均于术前非月经期抽取清晨空腹静脉血3ml测定血清CA125值。根据腹腔镜术中探查情况,分为子宫内膜异位症相关不孕组97例,输卵管因素不孕组99例做为对照组,然后分组统计CA125水平。同期选取腹腔镜术中具有典型病灶的腹膜型子宫内膜异位症的20名患者,15例非子宫内膜异位症的输卵管因素不孕妇女作为对照组,术中宫腔镜排除宫腔病变后刮取两组患者的在位子宫内膜组织经液氮快速冷冻后储存在-80℃冰箱备用,集中行HOXA10 mRNA的检测同时对这两组患者也进行了血清CA125的统计,以了解轻度子宫内膜异位症患者对子宫内膜容受性的影响。我们又按照CA125水平分组统计内异症不同CA125水平组的术后临床妊娠率以及与对照组的术后临床妊娠率比较。另外,我们选取2014年8月至2015年5月在烟台毓璜顶医院进行腹腔镜评估不孕症的患者,腹腔镜术中发现具有典型内异病灶的腹膜型子宫内膜异位症患者30例,卵巢型子宫内膜异位症患者15例,对照组为非子宫内膜异位症的输卵管因素不孕患者15例。分别留取腹膜型子宫内膜异位症患者典型内异病灶部位的盆腔腹膜;卵巢型子宫内膜异位症患者取材卵巢内异囊肿的囊壁。同时,宫腔镜检查排除宫腔病变后刮宫收集配对的同一患者的在位子宫内膜组织样本。另外,同法收集输卵管因素不孕妇女的在位子宫内膜组织,收集的组织经液氮快速冷冻后,储存在-80℃冰箱备用。入组的患者术后第一天清晨均留取空腹血5ml提取单个核细胞备用。应用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测HOXA11-AS、HOXA9、HOXA10、HOXA11及HOXA13在腹膜型、卵巢型内异症及对照组的在位内膜、异位内膜及外周血淋巴细胞中的差异性表达。结果1.内异症组与输卵管因素不孕组术前CA125比较表明:内异症组高于输卵管组(19.46±8.47vs 12.75±4.53),两组间差异具有统计学意义(p0.001);随着血清CA125水平升高,腹腔镜诊断子宫内膜异位症的诊断符合率升高。我们应用ROC曲线得出血清CA125为17.49U/ml时诊断轻度子宫内膜异位症的敏感性为56.2%,特异性为92.0%。2.亚组分析发现腹膜型内异症患者术前血清CA125水平明显高于对照组(19.58±5.84 vs 11.31±2.55),差异具有统计学意义(p0.05),而腹膜型内异症在位子宫内膜的HOXA10的表达低于对照组(0.1067±0.0413vs0.1809±0.0514),差异具有统计学意义(p0.05)。3.血清CA125≥18 U/ml的内异症不孕患者术后临床妊娠率低于CA12518U/ml的内异症不孕患者(41.2%vs 65.8%),CA125≥18 U/ml的内异症不孕患者术后临床妊娠率低于CA125≥18 U/ml的输卵管因素不孕患者(41.2%vs 76.9%),上述两组间比较差异均具有统计学意义(P0.05)。4.在腹膜型和卵巢型子宫内膜异位症患者中HOXA11-AS与HOXA9、HOXAl0、HOXA11和HOXA13 mRNA表达水平呈一致趋势,均在异位内膜组织中的高表达,在位内膜组织中低表达,两者差异具有统计学意义(p0.05)。将两种类型的内异症合并分析,结果与上述一致。5.腹膜型和卵巢型子宫内膜异位症的HOXA10和HOXA11均在在位内膜中低表达,表达水平明显低于输卵管不孕对照组,差异具有统计学意义(p0.05),而HOXA11-AS、HOXA9、HOXA13的表达水平在两组间无显著差异(P0.05)。6.LncRNA(HOXA11-AS)和HOXA10mRNA在腹膜型和卵巢型子宫内膜异位症患者的在位、异位内膜及外周血淋巴细胞中均有表达。三种组织中以异位内膜中IncRNA(HOXA11-AS)和HOXA10mRNA的表达最高,差异具有统计学意义(P0.05)。结论1.血清CA125≥18(17.49)U/ml可做为轻度子宫内膜异位症相关不孕患者的血清检测阈值,但要排除其他因素引起的不孕症。2.轻度子宫内膜异位症可能通过影响子宫内膜容受性而导致生育能力下降。因此,从子宫内膜容受性和术后妊娠率两个层面分析,轻度子宫内膜异位症合并不孕症的患者是值得我们早期发现并去关注。3.LncRNA HOXA11-AS在子宫内膜异位症的发病机制中可能起到一定的作用。然而,IncRNAHOXA11-AS在子宫内膜异位症相关不孕患者子宫内膜容受性方面的作用非常有限,有待于进一步深入研究。
【学位授予单位】：山东大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R711.71;R711.6
【图文】：

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图２血清ＣＡ１２５水平对轻度子宫内膜异位症患者的预测分析逡逑ＣＡ１２５邋５逡逑１００邋卜邋逦逡逑：逦＾＿＿ｒ逡逑８０邋－逡逑ｔ邋６０邋－逦＾邋＇逡逑蒗逦敏感性：￣５６．２逡逑Ｃ逦｜邋特异性：９２．０逡逑况邋４Ｕ邋－逦：标准：＞１７．４９逡逑２０邋１逡逑ｔ邋Ｉ邋１邋Ｉ邋Ｉ邋Ｉ邋Ｉ邋Ｉ邋Ｉ邋Ｉ邋Ｉ邋Ｉ邋Ｉ邋Ｉ邋Ｉ邋Ｉ邋Ｉ邋ｔ邋Ｉ邋Ｉ逡逑Ｏ邋２０逦４０逦６０逦８０逦１００逡逑１邋ＯＯ－Ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ逡逑图３子宫内膜异位症不孕患者不同ＣＡ１２５水平的术后妊娠率对比逡逑子宫内膜异位症不孕患者不同ＣＡ１２Ｓ水平的术后妊娠率对比逡逑７５．０逡逑８０邋６＾＾逡逑

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山东大学博士学位论文：逡逑术前血清ＣＡ１２５水平与术后子宫内膜异位症的诊断符合情血清ＣＡ１２５（Ｕ／ｍｌ）水平与ＥＭ诊断的符合情况逡逑逦８０Ｓ逦＝；邋ｉ逦ｉ逦Ｉ逦Ｉ逦Ｉ逦Ｉ＜？１０逦１５逦＞１０逦＞１５逦＞１８逦＞２０ＣＡ１２５水平逡逑血清ＣＡ１２５水平对轻度子宫内膜异位症患者的预测分析逡逑ＣＡ１２５邋５逡逑

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图１腹膜型子宫内膜异位症患者在位内膜与异位内膜的和邋／／６＞尤４９，７／ｄ４／０，邋／／６＞以＂和逦的表达情况（＿■邋ｐｅｒｉｔｏｎｅｕｍ邋ｅｎｄｏｍｅｔｒｉｏｓｉｓ逡逑１逦■邋ｃｏｎｔｒｏｌｓ逡逑＊邋＊逡逑卜ＬｉＬ逡逑？？—逦0＞逦0逦ＣＯ逡逑ｆ逦｜逦Ｓ逦Ｓ逦Ｓ逡逑！逦§逦Ｓ逦Ｓ逦ｇ逡逑ｏ逡逑图２腹膜型子宫内膜异位症患者在位内膜与对照组的在（ＨＯＸＡ１１－ＡＳ）邋ＷＩＯＸＡ９，邋ＨＯＸＡＩＯ，邋ＨＯＸＡ１邋１＾＼ＨＯＸＡ１３＾

【参考文献】