雌激素受体相关受体γ调控S100A4表达促子宫内膜癌侵袭转移的作用及机制研究

发布时间：2020-08-11 11:35

【摘要】：第一部分S100A4、E-cadherin和Vimentin在子宫内膜癌中的表达相关性研究目的:探究S100A4、E-cadherin和Vimentin蛋白在子宫内膜癌组织中的定位及相关性;探索S100A4对子宫内膜癌细胞E-cadherin和Vimentin表达的影响。方法:运用免疫组织化学方法(IHC)分析15例正常子宫内膜及50例子宫内膜癌组织中S100A4、E-cadherin和Vimentin蛋白的表达;构建S100A4靶向性小干扰RNA沉默S100A4表达,采用免疫印迹(Western blotting)及免疫荧光(IF)检测细胞中E-cadherin和Vimentin表达及细胞骨架结构变化。结果:1.S100A4和Vimentin蛋白在子宫内膜癌腺上皮细胞中的表达主要定位于胞浆和胞核部分,两者表达呈显著正相关(相关系数r=0.6862,P0.0001);E-cadherin表达主要定位于腺上皮胞膜及胞浆部分,其与S100A4的表达呈显著负相关(相关系数r=-0.5349,P0.0001)。2.下调子宫内膜癌HEC-1B细胞中S100A4的表达,细胞极性消失,形态向上皮表型转变,Western blotting及IF结果显示细胞内E-cadherin蛋白水平上升,Vimentin蛋白水平下降。结论:前期研究已证实S100A4能促进子宫内膜癌细胞的迁移及侵袭能力,本研究结果表明S100A4在子宫内膜癌组织中的表达与E-cadherin和Vimentin分别呈负相关及正相关,且能调控两者的表达,提示S100A4可能通过上皮-间质转化(EMT)过程促进子宫内膜癌的恶性进展。第二部分ERRγ在子宫内膜癌组织中的表达及其对S100A4的调控机制研究目的:探讨ERRγ在子宫内膜癌组织中的表达及其与S100A4表达的相关性;研究ERRγ对子宫内膜癌细胞S100A4表达的调控作用及调控机制。方法:采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)分析20例正常子宫内膜及20例子宫内膜癌组织中ERRγ和S100A4的m RNA水平;免疫组化分析ERRγ和S100A4在子宫内膜癌中的表达定位;构建ERRγ慢病毒过表达载体及小发夹干扰RNA,分别上、下调子宫内膜癌细胞中ERRγ的表达,Western blotting及qRT-PCR检测S100A4和E-cadherin表达变化;双荧光素酶报告分析ERRγ对S100A4基因启动子的激活作用。结果:1.ERRγ在子宫内膜癌组织中的m RNA及蛋白水平均显著高于正常内膜组织(P=0.0175),ERRγ与S100A4在子宫内膜癌中的转录水平呈正相关(相关系数r=0.557,P=0.01)。2.上调子宫内膜癌HEC-1A及AN3CA细胞中ERRγ的表达,S100A4表达上调,E-cadherin表达下调;相反,下调子宫内膜癌HEC-1B细胞中ERRγ表达,S100A4表达下调,E-cadherin表达上调。3.S100A4启动子区368-377bp、639-648bp和731-740bp位点均是预测的ERRγ可能的结合区域,荧光素酶报告分析结果显示S100A4基因转录起始点上游656-784bp区是ERRγ调控S100A4转录活性的主要区域,上调ERRγ可增强S100A4启动子转录活性。结论:ERRγ在子宫内膜癌中表达上调并与S100A4的表达正相关,且ERRγ可激活S100A4基因启动子促进其表达,提示ERRγ可能是子宫内膜癌中调控S100A4表达的重要因素,但ERRγ能否通过影响S100A4的表达影响子宫内膜癌细胞生物学功能还有待进一步阐明。第三部分S100A4介导ERRγ调控的子宫内膜癌细胞体外侵袭、迁移及在体肿瘤生长、转移能力的研究目的:研究ERRγ通过调控S100A4的表达引起的子宫内膜癌细胞迁移侵袭及在体肿瘤生长、转移能力变化。方法:运用Transwell小室实验分析上、下调ERRγ表达及回补S100A4表达后子宫内膜癌细胞迁移、侵袭能力的变化。选用4-6周龄雌性BALB/c裸鼠,右肩甲下接种子宫内膜癌细胞,构建裸鼠皮下移植瘤模型,肿瘤形成后游标卡尺每七天测量并记录肿瘤体积,绘制肿瘤生长曲线,于接种后42天处死裸鼠,取下瘤体后称重,并行免疫组织化学检测ERRγ及S100A4蛋白的表达。构建裸鼠尾静脉注射皮下移植模型,于接种后42天处死裸鼠,取出裸鼠肺及肝组织,大体观察及HE染色分析转移瘤数量。结果:1.上调子宫内膜癌HEC-1A和AN3CA细胞中的ERRγ表达后细胞迁移、侵袭能力增强,同时沉默S100A4的表达,细胞的迁移、侵袭能力下降;相反,下调ERRγ在HEC-1B细胞中的表达,细胞迁移、侵袭能力下降,同时过表达S100A4,细胞的侵袭、迁移能力得到回复。2.过表达ERRγ组裸鼠皮下移植瘤瘤体生长速度高于对照组,ERRγ稳定表达组第42天时取出的瘤体重量也显著高于对照组(1.22±0.53g vs 0.27±0.15g,P0.01);IHC结果显示,ERRγ稳定表达组S100A4水平高于对照组。3.尾静脉注射转移瘤模型结果显示,过表达ERRγ组裸鼠肺组织中转移瘤数量显著高于对照组(P=0.0109)。结论:ERRγ可能主要通过S100A4途径影响子宫内膜癌迁移、侵袭及在体肿瘤生长、转移等恶性生物学行为
【学位授予单位】：华中科技大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R737.33
【图文】：

图 1-1. E-cadherin、Vimentin 和 S100A4 在子宫内膜癌组织中的表达定位。(A-D)S100A4 在正常子宫内膜、高分化子宫内膜癌（G1）、中分化子宫内膜癌（G2）、低分化子宫内膜癌（G3）组织中的表达。（E-H）E-cadherin在正常内膜及不同病理分级子宫内膜癌组织中的表达。（I-L）E-cadherin在正常内膜及不同病理分级子宫内膜癌组织中的表达。（×200 倍）

图 1-1. E-cadherin、Vimentin 和 S100A4 在子宫内膜癌组织中的表达定位。S100A4 在正常子宫内膜、高分化子宫内膜癌（G1）、中分化子宫内膜癌（G2）分化子宫内膜癌（G3）组织中的表达。（E-H）E-cadherin在正常内膜及不同病级子宫内膜癌组织中的表达。（I-L）E-cadherin在正常内膜及不同病理分级子宫癌组织中的表达。（×200 倍）

华 中 科 技 大 学 博 士 学 位 论 文2. 下调 S100A4 对子宫内膜癌细胞 E-cadherin 和 Vimentin 表达的影响运用 S100A4 干扰质粒下调子宫内膜癌 HEC-1B 细胞中 S100A4 表达，结果倒置相差显微镜及运用免疫荧光显示细胞骨架均提示 HEC-1B 细胞失去细胞极性，梭形形态向上皮细胞表型转变，细胞的弥散能力受到抑制（图 1-3 A,B）。此外，western-blot 及免疫荧光分析下调 S100A4 对 E-cadherin 及 Vimentin 表达的影响，结果下调 S100A4 可显著抑制 HEC-1B 细胞 Vimentin 的表达，而 E-cadherin的表达上调（图 1-3C-D）。

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本文编号：2789017