当前位置:主页 > 医学论文 > 妇产科论文 >

ACTN4调控滋养细胞增殖和侵袭能力在早发型子痫前期发病中的作用研究

发布时间:2020-08-22 01:36
【摘要】:研究背景:早发型子痫前期(EO-PE)是发病于34周之前的一种妊娠特有的并发症,其发病原因众多,目前公认的滋养细胞侵袭力不足是其主要原因之一。细胞侵袭依赖于细胞骨架重塑和侵袭结构的形成,ACTN4作为肌动蛋白主要维持细胞骨架的完整性和调节细胞的运动。本课题旨在研究ACTN4在EO-PE胎盘滋养细胞中的表达,研究并探讨ACTN4表达异常对滋养细胞功能的影响,并探索其调控机制,以期为阐明子痫前期发病机制提供新的研究方向,并为子痫前期的预测和治疗提供潜在的靶点。方法:利用免疫组化法和Western blot法检测ACTN4在正常胎盘组织和EO-PE胎盘组织中的表达和定位,并分离原代滋养细胞,检测其在原代滋养细胞中的表达。然后用siRNA干扰方法对ACTN4进行敲降,并用CCK-8法、流式细胞周期和EdU法检测敲降细胞的增殖能力。用Western blot法检测敲降ACTN4后对AKT/GSK3β通路的影响。利用Co-IP法和胞质、胞膜分离法检测ACTN4对AKT膜转移及其活化的作用。用免疫荧光法和Co-IP法检测E-cadherin敲降细胞中ACTN4和β-catenin的定位和互作情况。用TRITC-phalloidin法检测敲降E-cadherin和(或)敲降ACTN4的JEG3细胞骨架的改变。并用Matrigel侵袭和Transwell迁移法检测各组细胞的侵袭和迁移能力。最后,通过尾静脉注射ACTN4干扰腺病毒构建ACTN4敲降孕鼠模型,测量孕鼠血压和胎盘、胎鼠重量情况,和胎盘、肾脏组织病理结构的变化及胎盘组织中ACTN4和AKT通路蛋白的表达情况。结果:免疫组化法和Western blot法结果显示,与正常胎盘滋养细胞相比,ACTN4在EO-PE胎盘滋养细胞中异常低表达。CCK-8法、流式细胞周期法和EdU法结果均显示敲降ACTN4显著降低HTR8/SVneo细胞的增殖能力,且Western blot法结果显示敲降ACTN4明显抑制AKT/GSK3β通路的活性。Co-IP法和胞质、胞膜分离法结果显示ACTN4和AKT之间存在相互作用,且ACTN4对于AKT膜转移并活化至关重要。另外,免疫荧光法、Co-IP法和Western blot法结果显示,E-cadherin敲降的JEG3细胞中,ACTN4和β-catenin相互作用关系明显增强,且这种增强主要表达定位于细胞伪足。TRITC-phalloidin法和侵袭迁移法结果显示,E-cadherin敲降的JEG3细胞骨架高度重塑且侵袭迁移能力明显增强,而在这基础之上再下调ACTN4的表达时,细胞骨架出现解聚,侵袭迁移能力随之明显减弱。最后,注射ACTN4干扰腺病毒的孕鼠,血压出现明显升高,胎盘和胎鼠重量出现明显下降,胎盘连接层面积和增殖细胞均出现明显减少,肾脏肾小球出现明显肿胀,胎盘ACTN4和AKT通路蛋白活性均明显下降。结论:ACTN4主要表达于胎盘的CTB细胞和iEVT细胞,且在EO-PE胎盘滋养细胞中的表达较正常组明显降低。ACTN4通过调控AKT的膜转位及活性进而调控滋养细胞的增殖能力,且ACTN4-β-catenin作为细胞骨架及细胞伪足形成的关键,参与滋养细胞侵袭和迁移能力,受E-cadherin负性调节。ACTN4敲降孕鼠出现胎盘化异常和PE样表型改变。
【学位授予单位】:重庆医科大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2019
【分类号】:R714.244
【图文】:

免疫组化法,绒毛,胎盘,蛋白表达


23图 1. ACTN4 在胎盘组织中的表达模式Figure 1. ACTN4 expression pattern in placentaA, 免疫组化法检测 ACTN4 在早孕组织中的表达模式。a, b, d, e 为绒毛组织,c, f 为蜕膜组织,AV, 锚定绒毛;FV,漂浮绒毛;CCT,细胞柱滋养细胞;STB,合体滋养细胞;CTB,细胞滋养层细胞;iEVT, 间质绒毛外滋养细胞。B,免疫组化法检测 ACTN4 在晚孕正常胎盘(a, c, e, g)和 EO-PE 胎盘(b, d, f, h)组织中的表达模式。BP, 胎盘基底面;DS,蜕膜面。C,Western blot 法检测 ACTN4 在早孕绒毛组织和正常足月胎盘组织中的蛋白表达。β-actin 作为内参;NS,无显著差异。D,Western blot 法检测 ACTN4 在正常胎盘组织和 EO-PE 胎盘组织中的蛋白表达。*P < 0.05,数据以平均值±标准误表示。

滋养细胞,免疫荧光法,骨架,蛋白表达


图 2. 正常原代滋养细胞和 EO-PE 原代滋养细胞 ACTN4 的蛋白表达和骨架改变Figure 2. ACTN4 expression and actin filaments in normal CTBs and EO-PE CTBsA,免疫荧光法鉴定原代 CTB 细胞的纯度。DAPI,染核。B,Western blot 法检测 ACTN4在正常原代 CTB 细胞(N-CTB)和 EO-PE 原代 CTB 细胞(EO-PE-CTB)中的表达,β-actin作为蛋白内参,**P < 0.01,数据以平均值±标准误表示。C,TRITC-phalloidin 检测滋养细胞骨架(actin-filament, F-actin)的改变。A, IF staining of CK7 (green) and vimentin (red) in isolated cells from human term placentas.Nuclei were counterstained by DAPI (blue). B, Western blotting of ACTN4 in primary CTB cellsisolated from normal and EO-PE placentas. Data are presented as the means±SEM. **P < 0.01. C,TRITC-Phalloidin staining on primary CTBs isolated from normal (N-CTB) and early-onset PE(EO-PE-CTB) placentas. All data are of 3 independent experiments performed in triplicate.3 讨论早期胎盘的发育及滋养细胞的分化是成功妊娠的关键[6]。CTB 细胞分化异常影响了滋养细胞对子宫的侵袭,从而导致螺旋动脉重构异常和胎盘灌注不足[7,8]。

蛋白表达,干扰效率,周期法,标准误


图 1. ACTN4 调节 HTR8/SVneo 细胞增殖能力Figure 1. ACTN4 regulates trophoblast proliferationA,Western blot 法检测 ACTN4 在 HTR8/SVneo、JEG3 和 JAR 细胞中的蛋白表达。B,Western blotting 法检测 ACTN4 的干扰效率。C,CCK-8 法检测 ACTN4 敲降 0 h,24 h,48 h,72 h 后细胞的增殖能力。D,流式细胞周期法检测敲降 ACTN4 48 h 后细胞周期的分布。E,EdU 法检测敲降 48 h 后细胞的 DNA 合成能力。NC,无显著差异,*P < 0.05,**P < 0.01,***P< 0.001,数据以平均值±标准误表示。A, Western blotting of ACTN4 in HTR-8/SVneo, JAR, and JEG3 cells. B, Interferenceefficiency of siRNAs targeting ACTN4 in HTR-8/SVneo cells was assessed by Western blotting. NC,negative control. C, CCK-8 assay on HTR-8/SVneo cells after 0, 24, 48, and 72 h of si-ACTN4#1and si-ACTN4#2 transfection. D, Cell cycle analysis of HTR-8/SVneo cells by flow cytometry after48 h of si-ACTN4#1 and si-ACTN4#2 transfection. E, EdU (pink) staining on HTR-8/SVneo cellsafter 48 h of si-ACTN4#1 and si-ACTN4#2 transfection. Nuclei were counterstained with DAPI(blue). Scale bars, 200 mm. All data are means ± SEM of 3 independent experiments performed intriplicate. NS, nonsignificant. *P < 0.05, **P < 0.01, ***P < 0.001.

【相似文献】

相关期刊论文 前10条

1 张坚贞;贺晶;;再发子痫前期相关因素及母子转归的单中心临床研究[J];浙江大学学报(医学版);2015年03期

2 寇帅;任永变;李丽;张晓丽;;子痫前期病理生理学特征与再妊娠复发的相关性研究[J];临床误诊误治;2019年04期

3 杨孜;;子痫前期-子痫的临床识症辨析之路——谈中国的理论与实践和突破与拓展[J];中国实用妇科与产科杂志;2019年08期

4 徐秋莲;全莉梅;章根琴;吴淋淋;黄续炜;李池慧;;血浆标志物与孕产妇子痫前期临床发病的相关分析[J];中华危重症医学杂志(电子版);2017年06期

5 周婧雅;张萌;李舒;王怡;;子痫前期国际疾病分类规则的修订进展研究[J];中国病案;2018年03期

6 伍绍文;赵友萍;;染色体微阵列技术在检测子痫前期发病机制中遗传变异的应用进展[J];中国优生与遗传杂志;2018年03期

7 李杰锋;蒋龙元;;子痫前期凝血功能异常及抗凝药在子痫前期中的应用[J];岭南急诊医学杂志;2018年01期

8 杨孜;;防范子痫前期综合征需多元化和有选择性[J];中国实用妇科与产科杂志;2018年05期

9 蔡雁;王晓莹;;如何监测、预防子痫前期走向重度[J];中国实用妇科与产科杂志;2018年05期

10 曹丽;李红梅;;中性粒细胞与淋巴细胞比值与子痫前期的相关性研究[J];中国妇幼保健;2018年10期

相关会议论文 前10条

1 周智平;;重度子痫前期孕妇血镉及胎盘11β-羟基类固醇脱氢酶2的表达及意义[A];2015年泛长三角围产医学学术年会暨浙江省围产医学学术年会论文汇编[C];2015年

2 刘小刚;;子痫前期及严重并发症的诊治[A];玉溪市医学会妇产专业委员会第六届一次学术年会材料汇编[C];2014年

3 孙丽洲;;子痫前期的麻醉及液体管理[A];中华医学会第三次全国妊娠期高血压疾病学术研讨会论文汇编[C];2011年

4 沈洁;杨孜;王伽略;;临床风险因素对子痫前期发病影响探讨[A];中华医学会第三次全国妊娠期高血压疾病学术研讨会论文汇编[C];2011年

5 牛建民;;问题与挑战:子痫前期再评价[A];中华医学会第三次全国妊娠期高血压疾病学术研讨会论文汇编[C];2011年

6 卢洁;;重度子痫前期病史妇女随访性研究[A];全国妇产科新技术、新理论进展研讨会、全国助产专业护士培训班论文汇编[C];2011年

7 翟宏;许建成;续薇;;重度子痫前期实验室指标检测结果分析及意义[A];中华医学会第七次全国中青年检验医学学术会议论文汇编[C];2012年

8 苟文丽;;重度子痫前期的管理与转运[A];中华医学会第十次全国妇产科学术会议产科会场(产科学组、妊高症学组)论文汇编[C];2012年

9 蒋萌;林建华;;子痫前期的高危因素分析和风险预测[A];中华医学会第十次全国妇产科学术会议产科会场(产科学组、妊高症学组)论文汇编[C];2012年

10 孙睿;牛建民;侯明敏;温济英;林小红;段冬梅;;子痫前期产后心血管代谢风险及相关因素研究[A];中华医学会第十次全国妇产科学术会议产科会场(产科学组、妊高症学组)论文汇编[C];2012年

相关重要报纸文章 前10条

1 李正;管理子痫前期应关注这一比值[N];健康报;2019年

2 李正;抓住子痫前期诊断的“黄金线索”[N];健康报;2018年

3 李正;新兴检测指标优化子痫前期疾病管理[N];健康报;2018年

4 闻唱;天冷妊高征偷袭准妈妈 高龄怀孕与肥胖是祸首[N];中国妇女报;2016年

5 健康时报记者 寇晓雯;罗氏诊断:18分钟识别子痫前期[N];健康时报;2016年

6 编译 王炜;孕妇出现子痫前期可增加心脏病风险[N];医药经济报;2009年

7 北京天坛医院妇产科 杨保军 陶金双;子痫前期:高龄孕妇多见[N];健康报;2016年

8 李正;革新检测技术为母婴安全护航[N];健康报;2016年

9 章关春邋孙美燕;妊高征母婴预后可以改善[N];健康报;2007年

10 北京大学附属第一医院妇产科教授 杨慧霞邋 陆铁琳;围产医学的四个研究热点[N];健康报;2007年

相关博士学位论文 前10条

1 彭威;ACTN4调控滋养细胞增殖和侵袭能力在早发型子痫前期发病中的作用研究[D];重庆医科大学;2019年

2 黄丽琼;2-甲氧雌二醇与早发型子痫前期关系的临床与实验研究[D];武汉大学;2017年

3 王钢;1、胎盘中11β-HSD2在子痫前期中作用的研究 2、H_2S对红细胞携氧功能的调控作用机制[D];中国人民解放军海军军医大学;2018年

4 郭雪箐;印迹基因IGF2和PHLDA2在子痫前期患者孕中期血清中表达情况及其作用初探[D];南方医科大学;2018年

5 熊希;LN-α5在子痫前期发病中的功能研究[D];重庆医科大学;2018年

6 薛平平;妊娠早期超低剂量脂多糖注射诱导子痫前期大鼠模型的研究[D];南京医科大学;2015年

7 林靓;子痫前期胎盘组织差异性甲基化基因筛选及TNFAIP8在子痫前期胎盘及外周血的表达[D];南方医科大学;2015年

8 张媛媛;子痫前期病理相关血清蛋白定量新方法的研究及临床初步应用[D];南京医科大学;2016年

9 崔丽峰;子痫前期胎盘组织中差异蛋白质的表达及血清学标志物水平变化的研究[D];吉林大学;2018年

10 卢静;趋化因子CXCL12/CXCR4/CXCR7轴在胎盘中的表达模式及其在子痫前期滋养细胞凋亡机制的研究[D];武汉大学;2016年

相关硕士学位论文 前10条

1 谢荫;髓样细胞表面触发受体-1与子痫前期发生发展的相关性研究[D];华中科技大学;2019年

2 张东方;重度子痫前期中胎盘、胎膜水通道蛋白3及脐血脂联素的表达[D];华北理工大学;2019年

3 李海营;RPS4Y1对HUVECs生物学功能的调控及其在子痫前期发病中的机制研究[D];重庆医科大学;2018年

4 寇帅;低剂量阿司匹林对子痫前期病史高危孕妇的临床效果研究[D];延安大学;2019年

5 李小琳;血液Endocan水平与子痫前期相关性的Meta分析[D];河南科技大学;2019年

6 路雪;血清BNP、LDH水平与子痫前期及不良妊娠结局的相关性研究[D];吉林大学;2019年

7 任俊颖;低分子肝素预防子痫前期及其对妊娠结局影响的Meta分析[D];吉林大学;2019年

8 吴秋雨;颗粒蛋白前体通过调控滋养层细胞的侵袭和凋亡对子痫前期发病的影响[D];江苏大学;2018年

9 姜一飞;子痫前期与妊娠期糖尿病的相关性分析[D];江苏大学;2018年

10 肖瑛;AGT、MTHFR和VEGF基因多态性与新疆汉族和维吾尔族妊娠妇女子痫前期发病风险的相关性研究[D];西北大学;2019年



本文编号:2800100

资料下载
论文发表

本文链接:https://www.wllwen.com/yixuelunwen/fuchankeerkelunwen/2800100.html


Copyright(c)文论论文网All Rights Reserved | 网站地图 |

版权申明:资料由用户97617***提供,本站仅收录摘要或目录,作者需要删除请E-mail邮箱bigeng88@qq.com