HOXA10对早期胎盘发育的影响及分子机制的初步研究

发布时间：2020-09-03 14:32

　　 研究背景与目的胚胎的成功植入和胎盘的正常发育对正常妊娠至关重要。胎盘滋养层细胞侵入子宫内膜,为胚胎发育所必须的营养、激素环境提供条件。胎盘发育需要经历一系列复杂的细胞事件,首先从绒毛外滋养层细胞的形成和分化开始。滋养层细胞干分化成绒毛外滋养层细胞,它是人类胚胎中最先分化、最先发育的细胞类型之一,为母体-胎儿界面仅有的可与母体免疫系统直接接触的胎儿细胞。该细胞具有多种功能,涉及细胞增殖、胚胎着床。在胚胎植入过程中、母体-胎儿免疫耐受的过程中发挥重要作用。滋养层细胞增殖、迁移、侵袭不足和过度均造成早期胎盘发育异常,进一步导致胚胎、胎儿死亡,引起流产和其他妊娠相关疾病。因此滋养层细胞功能的研究一直受到广泛关注。同源框基因在胚胎发育过程中具有重要的调控作用,含同源域因子GATA-3表达于滋养层细胞中,妊娠高血压疾病发展中,破坏Th1/Th2平衡,与妊娠高血压疾病的发展及严重程度密切相关。绒毛膜癌BeWo细胞系中,HOXA11低表达促进细胞滋养层向合体滋养层分化,促进了绒毛膜癌的发生发展。提示同源框基因对滋养层细胞发育具有重要调控作用。HOXA10在胚胎发育过程中若发生基因突变可引起苗勒管发育异常,引起双子宫、子宫纵隔等畸形。而它在胚胎早期发育阶段,即早期胎盘发育阶段所发挥的作用尚未有相关研究。本研究通过基因芯片技术发现HOXA10在早期胎盘组织中表达量显著高于中、晚期胎盘组织,提示它对早期胎盘发育有重要影响,进一步探讨了HOXA10对滋养层细胞增殖能力调控的必要性及相关分子机制。材料与方法1.以小鼠胎盘发育为模型,取小鼠胎盘发育的第6.5d,14.5d和19.5d的组织各3例,进行mRNA芯片检测。差异基因筛选条件为Fold change2.0,P0.05,筛选出与早期胎盘发育过程相关的同源框基因HOXA10。2.在C57小鼠胎盘组织、人胎盘组织中通过RT-PCR及western blot验证芯片结果。3.在滋养层细胞系HTR-8/SVneo中进行功能实验,利用小干扰RNA干扰HOXA10表达后,进行增殖功能实验,并检测细胞周期素依赖性蛋白激酶抑制物p57表达量变化。4.通过免疫组化法检测葡萄胎绒毛组织、人工流产绒毛组织、自然流产绒毛组织中HOXA10表达情况。验证HOXA10对滋养层细胞增殖力调控的重要性。研究结果1.HOXA10在人早期胎盘组织中的表达量显著高于中、晚期胎盘组织;2.人滋养层细胞HTR-8中干扰HOXA10表达后,细胞增殖能力明显减弱。细胞周期素依赖性蛋白激酶抑制物p57是人早期滋养层细胞中表达最高的周期调节剂,干扰HOXA10后p57高表达,抑制细胞周期;流式细胞仪检测各周期细胞数结果:G1期细胞数显著增加,S期细胞数明显减少;CCK8实验结果进一步验证干扰后细胞增殖能力明显减弱(P0.05)。3.人滋养层细胞中干扰HOXA10表达后,细胞凋亡水平无明显变化。滋养层细胞中干扰HOXA10后,通过流式细胞仪检测细胞凋亡水平,差异无统计学意义,HOXA10表达量改变不影响滋养层细胞凋亡(P0.05)。4.免疫组化法检测出人工流产绒毛组织中HOXA10表达明显低于完全性葡萄胎组织,显著高于自然流产绒毛组织。研究结论1、HOXA10在胎盘发育过程中的表达具有时间特异性,主要参与早期胎盘发育。2、HOXA10通过调控细胞周期素依赖性蛋白激酶抑制物p57,影响滋养层细胞增殖能力,避免过度增殖和增殖不足,是保证妊娠顺利的基础。
【学位单位】：中国人民解放军海军军医大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R714
【部分图文】：

R 检测小鼠早、中、晚期胎盘组织中 mRNA 水平，结果与人早期胎盘高表达，中、晚期呈逐渐下降趋势。CR 检测早、中、晚期胎盘组织中 HOXA10mRNA,结0mRNA 显著高于中、晚期胎盘组织，差异具有统计蛋白表达量显著高于中、晚期,差异有统计学意义（合，提示 HOXA10 对早期胎盘发育具有重要作用

：RT-PCR 检测三组胎盘组织中 mRNA 水平，早、中、晚呈逐渐降低趋势。B、C：We组胎盘组织中 HOXA10 蛋白表达，早、中、晚呈逐渐降低趋势。第二部分滋养层细胞功能实验转染 siRNA 后 HOXA10 在 HTR-8 细胞中表达明显降低在 HTR-8 细胞系中转染 HOXA10-siRNA24h 后收集细胞，运用 RT-PCR TR-8 细胞中 HOXA10mRNA 的表达量。结果显示： HOXA10mRNA 明A）。Western-blot 检测转染后 HTR-8 细胞中 HOXA10 蛋白的表达量，结10 蛋白水平明显降低，其中 si-RNA1 组尤为显著（图 3B 和图 3C）。结 干扰有效，siRNA-1 干扰效率最佳，效率达 80%，siRNA-2 干扰效率达

HOXA10 mRNA:转染 HOXA10-siRNA 后，验证转扰效率达 30%，差异具有统计学意义。(***p＜0.00A-2 组 HOXA10 蛋白水平下降，siRNA-1 组细胞中

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