Apatinib对宫颈癌的抑制作用及化疗敏感性影响的实验研究

发布时间：2020-09-07 10:06

　　目的:(1)研究单药Apatinib对宫颈癌的抑制作用。(2)研究SiHa细胞在Apatinib作用前后基因表达谱的差异。(3)研究Apatinib与传统化疗药物联合使用对宫颈癌细胞及裸鼠移植瘤模型的抑制作用,并分析联合效应。方法:(1)采用CCK8及克隆形成实验检测不同浓度Apatinib对宫颈癌细胞增殖能力的影响,绘制生长曲线,计算半数抑制浓度IC50;(2)通过流式细胞技术检测Apatinib对宫颈癌SiHa和Hcc94细胞凋亡及周期的影响;(3)通过Westem-blot检测Apatinib对宫颈癌SiHa和Hcc94细胞周期和凋亡相关蛋白以及VEGFR2及下游信号通路关键蛋白的表达和磷酸化激活情况;(4)通过基因表达谱芯片筛选Apatinib处理SiHa细胞前后的差异基因,并对其进行GO分析和Pathway分析,通过RT-PCR进行mRNA水平的验证;(5)CCK-8实验检测Apatinib与化疗药(顺铂和紫杉醇)分别单独和联合使用时对宫颈癌细胞SiHa和Hcc94的抑制增殖情况,,并判断其联用效应;(6)构建SiHa细胞裸鼠皮下移植瘤模型,研究Apatinib与紫杉醇分别单独与联合使用对肿瘤的抑制情况。结果:(1)CCK-8实验显示Apatinib呈剂量依赖性的抑制宫颈癌细胞的增殖,IC50分别为SiHa:13.9±2.4μM,Hcc94:21.8±3.4μM,C33A:26.6±3.1μM,HeLa:31.2±3.5μM;克隆形成实验显示Apatinib抑制宫颈癌细胞SiHa和Hcc94的克隆形成能力(P0.01,P0.01)。(2)流式细胞分析结果表明Apatinib诱导SiHa和Hcc94细胞发生凋亡(P0.01,P0.01)和G0/G1期阻滞(P0.01,P=0.016)。(3)Apatinib处理宫颈癌SiHa和Hcc94细胞36 h后,显著抑制VEGFR2、ERK和AKT的磷酸化。(4)表达谱芯片显示,部分参与细胞周期进展(CDK1,CCNC和CCND3)、细胞凋亡(DAD1和BAG1)和扩散(PCNA)的基因显著下调。MAPK/ERK(MAPK3、MAPK8和MAPK3K1)和TGF(TGFB1)信号通路的几个关键基因受到抑制。此外,Apatinib严重影响p53,蛋白酶体,转化生长因子-β,细胞周期,同源重组和错配修复信号通路并调控参与细胞周期、细胞分裂、DNA修复和细胞增殖的基因表达。(5)Apatinib与紫杉醇联合使用较单独使用两种药物具有更显著的抗肿瘤作用,表现为协同作用;而Apatinib与顺铂联合使用则表现为叠加效应。(6)体内实验显示,与对照组相比,Apatinib组、紫杉醇组以及联用组小鼠肿瘤体积均减小(P=0.043,P=0.031,P0.01),Apatinib组、紫杉醇组以及联用组小鼠肿瘤重量也明显小于对照组(P=0.045,P=0.024,P0.01);与对照组相比,紫杉醇组VEGFR2的磷酸化水平无明显变化,Apatinib组和联用组VEGFR2的磷酸化水平显著降低(P=0.033,P=0.019);Apatinib组、紫杉醇组和联用组Ki67表达均低于对照组(P=0.041,P=0.029,P0.01)。结论:Apatinib单独使用对体内外宫颈癌细胞均有显著的抑制增殖作用,和紫杉醇联用时产生良好的协同抗肿瘤效应,因此,Apatinib可能成为临床治疗宫颈癌的新选择。
【学位单位】：江南大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R737.33
【部分图文】：

曲线,细胞株,宫颈癌细胞,细胞生存

并绘制细胞生存曲线（图 2），实验癌细胞 HeLa、SiHa、Hcc94、C33A 的增殖，其.4）μM、（26.6±3.1）μM、（21.8±3.43）μ宫颈癌细胞单细胞增殖能力的影响，我们选更敏感的细胞株SiHa和Hcc94 进行了克隆形a 和 Hcc94 细胞的克隆形成能力，t 检验结果显异显著，有统计学意义（SiHa:P＜0.01；Hcc

趋势图,宫颈癌细胞,趋势图,克隆形成

颈癌细胞 HeLa、SiHa、Hcc94、C33A 的增殖，其 I±2.4）μM、（26.6±3.1）μM、（21.8±3.43）μMb 对宫颈癌细胞单细胞增殖能力的影响，我们选择nib 更敏感的细胞株SiHa和Hcc94 进行了克隆形成iHa 和 Hcc94 细胞的克隆形成能力，t 检验结果显示差异显著，有统计学意义（SiHa:P＜0.01；Hcc94:a、SiHa、Hcc94、C33A 四种细胞株中 VEGFR2 和 p-VEG

细胞周期分布,宫颈癌细胞,克隆形成,统计学意义

图 3.Apatinib 抑制宫颈癌细胞克隆形成注：*与对照组相比，P<0.05，差异有统计学意义。.2 Apatinib 诱导 SiHa 和 Hcc94 细胞发生周期阻滞我们通过流式细胞技术检测 0 μMApatinib，10 μMApatinib，20 μMApatinib 分SiHa 和 Hcc96 细胞 36 h 后细胞周期分布情况，实验结果显示 Apatinib 处理组 G比例明显高于对照组，表明 Apatinib 可诱导宫颈癌 SiHa 和 Hcc94 细胞发生 G滞（SiHa:P<0.01；Hcc94:P<0.05）（图 4A 和 4B）。

【参考文献】